肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响

发布时间：2024-06-07 04:07

　　目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响。方法经RT-PCR法扩增EV71和CA16的VP1序列,插入至载体pcDNA3. 1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1。分别转染人支气管上皮细胞16HBE,于转染后24、48和72 h收集样本,进行细胞内天然免疫相关信号分子表达的检测和刺激T细胞增殖的检测。结果经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1构建正确。与阴性对照组比较,EV71-VP1组IFNγ、OX40L、RANKL、TNF-α和IL-2的水平上调,而CA16-VP1组的上调幅度较小。EV71-VP1及CA16-VP1组16HBE细胞的胞内外提取物均可明显刺激分泌IFNγ的T细胞增殖(P <0. 05)。结论 EV71和CA16 VP1蛋白在人上皮细胞16HBE中表达后,可差异性诱导细胞中天然免疫信号...

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 毒株、质粒及细胞
    1.2 血液
    1.3 主要试剂
    1.4 重组质粒的构建
    1.5 细胞转染
    1.6 转染细胞中VP1基因的m RNA转录水平检测
    1.7 转染细胞中VP1蛋白水平的检测
    1.8 转染细胞中天然免疫反应相关信号分子表达趋势的动力学检测
    1.9 人T细胞流式分选
    1.1 0 转染细胞内外产物对T细胞非特异性增殖刺激效应的检测
    1.1 1 统计学分析
2 结果
    2.1 目的基因PCR产物的鉴定
    2.2 重组质粒的鉴定
    2.3 转染细胞中VP1基因m RNA的转录水平
    2.4 转染细胞中VP1蛋白的水平
    2.5 EV71和CA16 VP1蛋白对16HBE细胞内天然免疫相关信号分子反应的动力学作用
    2.6 转染细胞内外产物对T细胞非特异性增殖的刺激效应
3 讨论



本文编号：3990757