犬细小病毒乳胶凝集快速检测方法的建立和应用
发布时间：2024-03-22 21:34
犬细小病毒病是对宠物临床上危害较大的传染病之一,我国徐汉坤在1983年首次报道了犬细小病毒病,虽然该病出现至今只有30年时间,但是该病发病比较急、死亡率比较高,给养犬业带来了严重的经济损失。 CPV是单链DNA病毒,但变异速率与RNA病毒相当,目前已经出现了三个亚型,即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c。根据临床症状表现主要分为肠炎型和心肌炎型两种类型。但现在心肌炎型很少见,以肠炎型为主。临床上宠物医院对该病的诊断主要使用进口的胶体金试纸条,成本比较高。本研究旨在建立一种犬细小病毒乳胶凝集快速检测方法,为宠物临床提供一种快速、简单、便宜的检测方法。 本研究运用本实验室制备的抗CPV-2b亚型单克隆抗体,致敏羧化乳胶颗粒,用单抗致敏乳胶,摸索偶联的最佳条件,包括致敏的抗体量和致敏时间等。乳胶检测试剂自身稳定、特异性好、敏感度高,最终建立了一种犬细小病毒乳胶凝集检测试剂和检测方法,并对临床样品进行了检测。 在武汉市的宠物医院采集了病料150份,其中有91份病料接种F81细胞,提取DNA模板,PCR扩增583bp的片段,经测序后结果显示有72份是CPV-2a亚型(79.1%),9份是C...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表(Abbreviation)
第1章 文献综述
引言
1.1 CPV的病原学
1.2 CPV的流行情况
1.2.1 CPV的分子流行情况
1.2.2 CPV的流行特点
1.3 犬细小病毒病的临床症状
1.4 CPV的感染机制
1.5 CPV的诊断
1.5.1 病毒分离(Ⅵ)
1.5.2 血凝试验(HA)
1.5.3 酶联免疫吸附反应(ELISA)
1.5.4 聚合酶链式反应(PCR)
1.5.5 胶体金检测方法
1.5.6 乳胶凝集试验检测方法(LAT)
1.6 CPV的预防与治疗
1.6.1 CPV的预防
1.6.2 CPV的治疗
1.7 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 细胞、病料、菌种、载体、抗体
2.1.2 相关试剂及耗材
2.1.3 主要试剂及溶液的配置
2.1.4 试验器材
2.1.5 本研究所用寡核苷酸引物
2.2 试验方法
2.2.1 乳胶颗粒致敏
2.2.2 犬细小病毒乳胶凝集检测方法的操作步骤和结果判定
2.2.3 抗体与乳胶偶联条件的优化
2.2.4 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的敏感性和特异性
2.2.5 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的重复性试验
2.2.6 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的保存期试验
2.2.7 犬细小病毒病料的采集及流行病学调查
2.2.8 犬细小病毒乳胶凝集与胶体金试纸条和PCR检测方法的比较
第3章 结果与分析
3.1 抗体与乳胶偶联条件的优化
3.1.1 最佳偶联抗体量的确定
3.1.2 最佳偶联时间的确定
3.2 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的敏感性和特异性
3.2.1 敏感性试验
3.2.2 特异性试验
3.3 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的重复性试验
3.3.1 批内重复性试验
3.3.2 批间重复性试验
3.4 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的保存期试验
3.5 犬细小病料的采集和流行病学
3.5.1 病料的采集
3.5.2 华中地区犬细小病毒的流行病学
3.6 CPV乳胶凝集与胶体金试纸条及PCR检测方法的比较
第4章 讨论与结论
4.1 讨论
4.1.1 CPV流行病学
4.1.2 CPV乳胶凝集检测方法的研究
4.2 结论
参考文献
硕士期间进行的其他工作
摘要
引言
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 病毒、菌种、细胞、质粒
1.1.2 相关试剂及耗材
1.1.3 主要试剂及溶液的配置
1.1.4 本研究所用寡核苷酸引物
1.2 试验方法
1.2.1 转移质粒的构建
1.2.2 重组病毒的构建
1.2.3 一步法增殖曲线
1.2.4 空斑大小的比较
1.2.5 UL0.7的克隆与原核表达
1.2.6 UL0.7兔多抗的制备
2. 结果与分析
2.1 UL0.7基因的生物信息学预测
2.2 重组病毒的构建与鉴定
2.2.1 BHV-5ΔUL0.7/EGFP+重组病毒的构建
2.2.2 BHV-5ΔUL0.7/EGFP+重组病毒PCR鉴定
2.3 重组病毒PFU的测定
2.4 空斑大小的比较
2.5 一步生长曲线的绘制
2.6 UL0.7兔多抗的检测
3. 讨论与结论
3.1 讨论
3.2 结论
参考文献
附录
致谢
本文编号：3934982
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表(Abbreviation)
第1章 文献综述
引言
1.1 CPV的病原学
1.2 CPV的流行情况
1.2.1 CPV的分子流行情况
1.2.2 CPV的流行特点
1.3 犬细小病毒病的临床症状
1.4 CPV的感染机制
1.5 CPV的诊断
1.5.1 病毒分离(Ⅵ)
1.5.2 血凝试验(HA)
1.5.3 酶联免疫吸附反应(ELISA)
1.5.4 聚合酶链式反应(PCR)
1.5.5 胶体金检测方法
1.5.6 乳胶凝集试验检测方法(LAT)
1.6 CPV的预防与治疗
1.6.1 CPV的预防
1.6.2 CPV的治疗
1.7 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 细胞、病料、菌种、载体、抗体
2.1.2 相关试剂及耗材
2.1.3 主要试剂及溶液的配置
2.1.4 试验器材
2.1.5 本研究所用寡核苷酸引物
2.2 试验方法
2.2.1 乳胶颗粒致敏
2.2.2 犬细小病毒乳胶凝集检测方法的操作步骤和结果判定
2.2.3 抗体与乳胶偶联条件的优化
2.2.4 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的敏感性和特异性
2.2.5 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的重复性试验
2.2.6 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的保存期试验
2.2.7 犬细小病毒病料的采集及流行病学调查
2.2.8 犬细小病毒乳胶凝集与胶体金试纸条和PCR检测方法的比较
第3章 结果与分析
3.1 抗体与乳胶偶联条件的优化
3.1.1 最佳偶联抗体量的确定
3.1.2 最佳偶联时间的确定
3.2 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的敏感性和特异性
3.2.1 敏感性试验
3.2.2 特异性试验
3.3 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的重复性试验
3.3.1 批内重复性试验
3.3.2 批间重复性试验
3.4 犬细小病毒乳胶凝集检测试剂的保存期试验
3.5 犬细小病料的采集和流行病学
3.5.1 病料的采集
3.5.2 华中地区犬细小病毒的流行病学
3.6 CPV乳胶凝集与胶体金试纸条及PCR检测方法的比较
第4章 讨论与结论
4.1 讨论
4.1.1 CPV流行病学
4.1.2 CPV乳胶凝集检测方法的研究
4.2 结论
参考文献
硕士期间进行的其他工作
摘要
引言
1. 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 病毒、菌种、细胞、质粒
1.1.2 相关试剂及耗材
1.1.3 主要试剂及溶液的配置
1.1.4 本研究所用寡核苷酸引物
1.2 试验方法
1.2.1 转移质粒的构建
1.2.2 重组病毒的构建
1.2.3 一步法增殖曲线
1.2.4 空斑大小的比较
1.2.5 UL0.7的克隆与原核表达
1.2.6 UL0.7兔多抗的制备
2. 结果与分析
2.1 UL0.7基因的生物信息学预测
2.2 重组病毒的构建与鉴定
2.2.1 BHV-5ΔUL0.7/EGFP+重组病毒的构建
2.2.2 BHV-5ΔUL0.7/EGFP+重组病毒PCR鉴定
2.3 重组病毒PFU的测定
2.4 空斑大小的比较
2.5 一步生长曲线的绘制
2.6 UL0.7兔多抗的检测
3. 讨论与结论
3.1 讨论
3.2 结论
参考文献
附录
致谢
本文编号：3934982
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