布鲁氏菌Omp25蛋白通过PD-1诱导的microRNA调控IL-12表达
发布时间：2024-03-24 13:12
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌感染引起的一种人畜共患传染病,临床表现多种多样,动物感染后导致妊娠母畜流产,雄性动物睾丸炎;人类感染可引起波浪热、多汗、关节肿痛、肝脾肿大等症状。不仅对畜牧业造成重大的经济损失,还严重威胁人类健康。布鲁氏菌具有多种致病因子,采取多种逃避机体免疫的机制,使它们能够在细胞内存活下来并在细胞内进行复制。巨噬细胞作为先天免疫的效应细胞,在抵御病原体入侵过程中起重要作用。然而布鲁氏菌可以逃避巨噬细胞的杀伤作用,在巨噬细胞内生存和繁殖,造成机体的慢性感染。研究表明,野生型布鲁氏菌感染抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12,还能够抑制巨噬细胞吞噬功能以及抗原提呈,从而抑制Th1细胞免疫,导致机体不能有效清除布鲁氏菌。然而与野生型相比,猪布鲁氏菌Omp25缺失突变株对巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12的抑制作用减弱,前期研究已经证实Omp25可以抑制巨噬细胞分泌TNF-α,然而,Omp25蛋白是否可以调控巨噬细胞IL-12的产生还未见相关报道。本研究拟以Omp25重组腺病毒rAd-Omp25感染THP-1细胞,经过LPS/R848刺激,ELISA检测Omp25对巨噬细胞产生IL-...
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 布鲁氏菌与免疫反应研究进展
1.1 布鲁氏菌病原简介
1.2 布鲁氏菌病的流行特点
1.2.1 传染源和传播途径
1.2.2 布鲁氏菌的危害
1.3 布鲁氏菌的抗原与毒力因子
1.3.1 布鲁氏菌脂多糖
1.3.2 布鲁氏菌外膜蛋白
1.3.3 布鲁氏菌毒力相关因子
1.4 IL-12与microRNA的功能
1.4.1 IL-12功能
1.4.2 microRNA的功能
1.5 布鲁氏菌与宿主的相互作用
1.6 布鲁氏菌逃逸宿主的抗感染免疫机制
1.6.1 布鲁氏菌逃避天然免疫
1.6.2 布鲁氏菌逃避适应性免疫
1.7 本研究的目的及意义
第二章 Omp25在转录和转录后水平调控IL-12的表达
2.1 材料
2.1.1 菌株、细胞
2.1.2 主要试剂
2.1.3 试验仪器及耗材
2.2 方法
2.2.1 Omp25对LPS/R848诱导THP-1细胞产生IL-12p70 的影响
2.2.2 Omp25对LPS/R848诱导THP-1细胞表达IL-12p35和p40 的影响
2.2.3 Omp25对LPS/R848刺激的THP-1细胞中il12A和 il12B mRNA水平的影响
2.2.4 Omp25对LPS/R848诱导的il12A和 il12B转录的影响
2.2.5 统计学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 重组腺病毒rAd-Omp25感染诱导Omp25在THP-1细胞中的表达
2.3.2 Omp25抑制LPS/R848诱导的IL-12p70 产生
2.3.3 Omp25抑制LPS/R848诱导的IL-12p35 表达
2.3.4 Omp25抑制LPS/R848诱导的IL-12p40 表达
2.3.5 Omp25下调LPS/R848刺激细胞中il12B的 mRNA水平
2.3.6 Omp25抑制il12B的转录而不影响il12A的转录
2.3.7 Omp25抑制NF-κB p65的转录活性
2.3.8 Omp25抑制IκB的磷酸化和NF-κB p65 的入核
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 Omp25蛋白通过PD-1诱导的miRNAs调控IL-12的表达
3.1 试验材料
3.1.1 菌株
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 调控IL-12表达的miRNAs及其影响
3.2.2 检测单核/巨噬细胞中PD-1信号对IL-12的影响
3.2.3 统计学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 Omp25表达可上调miR-23b、miR-21-5p和miR-155的水平
3.3.2 Omp25上调miR-23b、miR-21-5p和miR-155表达的特征
3.3.3 miR-23b、miR-21-5p和miR-155对IL-12p40 和IL-12p35 表达的影响
3.3.4 miR-23b、miR-21-5p和miR-155抑制剂对IL-12p40和IL-12p35表达的影响
3.3.5 miR-23b、miR-21-5p和miR-155抑制剂对IL-12p70产生的影响
3.3.6 miR-23b和miR-21-5p靶基因的筛选与鉴定
3.3.7 miR-23b和miR-155对il12B mRNA、IL-12p40蛋白水平的调控作用
3.3.8 miR-155靶蛋白的验证
3.3.9 单核/巨噬细胞中PD-1信号对IL-12的影响
3.4 讨论
3.5 小结
结论与创新点
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3937502
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【学位级别】：硕士
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摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 布鲁氏菌与免疫反应研究进展
1.1 布鲁氏菌病原简介
1.2 布鲁氏菌病的流行特点
1.2.1 传染源和传播途径
1.2.2 布鲁氏菌的危害
1.3 布鲁氏菌的抗原与毒力因子
1.3.1 布鲁氏菌脂多糖
1.3.2 布鲁氏菌外膜蛋白
1.3.3 布鲁氏菌毒力相关因子
1.4 IL-12与microRNA的功能
1.4.1 IL-12功能
1.4.2 microRNA的功能
1.5 布鲁氏菌与宿主的相互作用
1.6 布鲁氏菌逃逸宿主的抗感染免疫机制
1.6.1 布鲁氏菌逃避天然免疫
1.6.2 布鲁氏菌逃避适应性免疫
1.7 本研究的目的及意义
第二章 Omp25在转录和转录后水平调控IL-12的表达
2.1 材料
2.1.1 菌株、细胞
2.1.2 主要试剂
2.1.3 试验仪器及耗材
2.2 方法
2.2.1 Omp25对LPS/R848诱导THP-1细胞产生IL-12p70 的影响
2.2.2 Omp25对LPS/R848诱导THP-1细胞表达IL-12p35和p40 的影响
2.2.3 Omp25对LPS/R848刺激的THP-1细胞中il12A和 il12B mRNA水平的影响
2.2.4 Omp25对LPS/R848诱导的il12A和 il12B转录的影响
2.2.5 统计学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 重组腺病毒rAd-Omp25感染诱导Omp25在THP-1细胞中的表达
2.3.2 Omp25抑制LPS/R848诱导的IL-12p70 产生
2.3.3 Omp25抑制LPS/R848诱导的IL-12p35 表达
2.3.4 Omp25抑制LPS/R848诱导的IL-12p40 表达
2.3.5 Omp25下调LPS/R848刺激细胞中il12B的 mRNA水平
2.3.6 Omp25抑制il12B的转录而不影响il12A的转录
2.3.7 Omp25抑制NF-κB p65的转录活性
2.3.8 Omp25抑制IκB的磷酸化和NF-κB p65 的入核
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 Omp25蛋白通过PD-1诱导的miRNAs调控IL-12的表达
3.1 试验材料
3.1.1 菌株
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 调控IL-12表达的miRNAs及其影响
3.2.2 检测单核/巨噬细胞中PD-1信号对IL-12的影响
3.2.3 统计学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 Omp25表达可上调miR-23b、miR-21-5p和miR-155的水平
3.3.2 Omp25上调miR-23b、miR-21-5p和miR-155表达的特征
3.3.3 miR-23b、miR-21-5p和miR-155对IL-12p40 和IL-12p35 表达的影响
3.3.4 miR-23b、miR-21-5p和miR-155抑制剂对IL-12p40和IL-12p35表达的影响
3.3.5 miR-23b、miR-21-5p和miR-155抑制剂对IL-12p70产生的影响
3.3.6 miR-23b和miR-21-5p靶基因的筛选与鉴定
3.3.7 miR-23b和miR-155对il12B mRNA、IL-12p40蛋白水平的调控作用
3.3.8 miR-155靶蛋白的验证
3.3.9 单核/巨噬细胞中PD-1信号对IL-12的影响
3.4 讨论
3.5 小结
结论与创新点
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3937502
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