玻璃化冷冻中冷冻因素对MⅡ小鼠卵母细胞的影响

发布时间：2017-03-20 03:07

  本文关键词：玻璃化冷冻中冷冻因素对MⅡ小鼠卵母细胞的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨玻璃化冷冻中冷冻因素对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。方法:①根据不同平衡时间进行分组:将卵母细胞随机分为新鲜组、平衡时间5、10、20 min组(即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组卵母细胞的存活率、透明带破裂率、质膜破裂率、卵周隙增宽率;对于解冻后存活的卵母细胞进行受精、培养与新鲜组比较观察其发育潜能。②根据载体不同进行分组:开放式载体(OPS)与封闭式(CPS)载体分别冻存带卵丘细胞(COC)或剥除卵丘细胞(OD)的小鼠卵丘复合体,复苏后分别作体外受精—胚胎培养,观察其存活率及发育潜能。结果:①经玻璃化冷冻后冻存卵母细胞的存活率Ⅰ、Ⅱ组间差异有统计学意义(81.9%vs57.3%,χ2=7.13,P0.05);Ⅱ、Ⅲ组间差异有统计学意义(57.3%vs25%,χ2=8.22,P0.05);Ⅰ、Ⅲ组间差异有显著统计学意义(81.9%vs25%,χ2=17.92,P0.01)。透明带破裂率、质膜破裂率、及卵周隙增宽率由于样本例数少,未作统计学处理。新鲜组和冷冻组间受精率具有统计学意义(71.6%vs36%,χ2=13.92,P0.01)卵裂率、优质胚胎率差异均无统计学意义(97.6%vs94.4%,χ2=1.82,P0.05;95.2%vs88.2%,χ2=2.16,P0.05).②OPS组的存活率略高于CPS组,无统计学差异(68%vs65.3%,χ2=1.32,P0.05)。OPS组内COC组的复苏率显著高于DO组,有统计学差异(78.6%vs57.4%,χ2=11.82,P0.05),而COC组与DO组的受精率及囊胚率相比,均无统计学差异(P0.05)。在CPS组同样COC组的复苏率(75.4%)显著高于DO组(55.1%),有统计学差异(75.4%vs55.1%,χ2=11.98,P0.05),而两组的受精率和囊胚形成率无统计学差异,与OPS组是否包裹颗粒细胞冻存的结论一致。结论:①掌握合适的预平衡时间能够避免小鼠卵母细胞冷冻损伤。平衡时间为5min组的卵母细胞存活率最高。②冻存复苏后的存活卵受精后受精率下降,但受精后胎的发育潜能似乎未受很大影响③封闭式载体有效避免了潜在的污染问题,但不同载体对卵子存活率无显著影响。④卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中可以起到保护作用,并对胚胎后期的发育有一定的改善。
【关键词】：小鼠 卵母细胞 玻璃化冷冻 平衡时间 开放式载体 封闭式载体
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.8
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英汉缩略词对照表8-9
• 前言9-12
• 1 材料与方法12-16
• 1.1 实验材料与仪器12-13
• 1.2 实验方法13-16
• 2 结果16-19
• 2.1 平衡时间对小鼠卵母细胞存活率以及形态学损伤特征的影响16-17
• 2.2 平衡时间对小鼠卵母细胞发育潜能的影响17-18
• 2.3 不同载体及是否拆除颗粒细胞对小鼠卵母细胞的影响18-19
• 附图19-22
• 3 讨论22-26
• 3.1 玻璃化冷冻原理及冷冻损伤22
• 3.2 冷冻中颗粒细胞的作用和冷冻载体的选择22-24
• 3.3 平衡时间24-25
• 3.4 冻存卵的受精问题25-26
• 结论26-27
• 参考文献27-30
• 综述30-39
• 参考文献37-39
• 攻读学位期间发表的学术论文目录39-40
• 致谢40

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