EFNB2和TM4SF1基因在宫颈癌干细胞样细胞中的表达分析

发布时间：2017-03-20 07:00

  本文关键词：EFNB2和TM4SF1基因在宫颈癌干细胞样细胞中的表达分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景及目的： 肿瘤干细胞学说认为肿瘤干细胞是肿瘤发生与复发的根源，针对肿瘤干细胞展开靶向治疗是肿瘤治疗的新方向。由于缺乏公认的宫颈干细胞标记物，使宫颈癌干细胞的研究极为困难，虽然，有学者采用SP法或无血清悬浮培养法，分离出了宫颈癌干细胞样细胞，但它仍不够纯化，更缺乏对明确的表面标记物。本研究拟采用差异基因显示技术，检测经证实富集了宫颈癌干细胞的研究组细胞（SP+细胞及ABCG2+细胞），与缺乏宫颈癌干细胞的对照组细胞进行比较，依据各基因表达丰度差异，筛选出差异序列。为宫颈癌干细胞表面标记物的筛选提供依据，为进一步的宫颈肿瘤干细胞的分离与鉴定打下基础，为宫颈癌以肿瘤干细胞为标靶进行治疗提供线索。 方法： 1、选取于我院手术治疗的宫颈鳞状细胞癌IB2期患者标本，采用组织块法进行原代培养，冻存、复苏，利用流式细胞技术对建系培养的宫颈癌原代细胞进行SP分选。 2、选取宫颈癌Hela细胞进行培养，流式细胞技术进行ABCG2分选。 3、分别抽提分选的SP细胞、NSP细胞、ABCG2+细胞、ABCG2-细胞总RNA，逆转录合成cDNA，利用芯片筛选两组细胞的差异表达基因。 4、对宫颈癌P10代细胞分选SP细胞和NSP细胞提取RNA进行RT-PCQ检测，检测目的基因的mRNA表达水平，验证差异基因。 结果： 经过数据分析，在宫颈癌原代细胞中SP细胞的比例为1.66%。与之相对的，Hoechst33342阳性细胞为非侧群细胞（NSP）。在加入ABC转运蛋白抑制剂维拉帕米后，低Hoechst的SP细胞的比例显著降低（＜1%）。 免疫荧光标记流式细胞仪检测宫颈癌细胞株Hela细胞中ABCG2+细胞所占比例为11%，，其余为ABCG2-细胞亚群。 ABCG2+组与ABCG2-组相比，上调基因1801个，下调基因229。SP组与NSP组相比，上调基因1019个，下调基因405。两组对照下调基因中存在55个交集基因，上调基因中存在12个交集基因。 EFNB2基因和TM4SF1基因在SP细胞及NSP细胞中均表达。RT-PCR实验结果显示，SP细胞中EFNB2基因表达量是NSP细胞的(7.12)倍。TM4SF1基因表达量是NSP细胞的(7.68)倍。 结论： 1、宫颈癌原代细胞中分离的SP细胞同ABCG2+细胞一样，具有肿瘤干细胞的特性。 2、TM4SF1和EFNB2基因在宫颈癌原代SP细胞中高表达，可作为宫颈癌干细胞候选特异性表面标记物。 3、TM4SF1和EFNB2基因为分离宫颈癌干细胞提供了线索,为肿瘤干细胞靶向治疗提供了新的思路和依据。
【关键词】：EFNB2 TM4SF1 宫颈癌干细胞样细胞 差异基因
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 中英文缩略词8-11
• 第1章 综述11-17
• 1.1 肿瘤干细胞的概况11-12
• 1.2 肿瘤干细胞的分离纯化12-14
• 1.3 差异基因与肿瘤干细胞的研究14-17
• 1.3.1 差异显示技术在肿瘤研究中的应用14-15
• 1.3.2 差异显示技术的分类15-17
• 第2章 宫颈癌干细胞样细胞的分选17-24
• 2.1 宫颈癌 Hela 细胞的培养及 ABCG2 分选17-20
• 2.1.1 材料17-18
• 2.1.2 方法18-19
• 2.1.3 结果19-20
• 2.2 宫颈癌原代细胞的培养及 SP 分选20-24
• 2.2.1 材料20-21
• 2.2.2 方法21-22
• 2.2.3 结果22-24
• 第3章 基因芯片技术筛选宫颈癌细胞差异基因24-31
• 3.1 材料24-25
• 3.1.1 实验细胞24
• 3.1.2 主要仪器和设备24
• 3.1.3 主要试剂24-25
• 3.2 试验方法25-26
• 3.2.1 基因芯片表达谱检测25-26
• 3.3 结果26-31
• 3.3.1 各个样本 RNA 检测报告26-27
• 3.3.2 基因序列检测及分析27-31
• 第4章 宫颈癌原代细胞分选 SP 细胞及 NSP 细胞中差异基因的表达31-37
• 4.1 材料31-32
• 4.1.1 实验细胞31
• 4.1.2 主要仪器及设备31-32
• 4.1.3 主要试剂32
• 4.2 试验方法 RT-PCR 方法32-35
• 4.2.1 标本收集32
• 4.2.2 引物的设计与合成32-33
• 4.2.3 Trizol 法提取总 RNA33
• 4.2.4 反转录合成 cDNA33-34
• 4.2.5 荧光定量 RPC 的扩增34
• 4.2.6 结果判定34-35
• 4.3 结果35-37
• 第5章 讨论37-43
• 5.1 宫颈癌干细胞的培养与分选37-38
• 5.2 差异基因筛选宫颈癌干细胞38-39
• 5.3 EFNB2 基因在宫颈癌干细胞样细胞中的表达39-41
• 5.4 TM4SF1 基因在宫颈癌干细胞样细胞中的表达41-43
• 第6章 结论43-44
• 参考文献44-49
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果49-50
• 致谢50

【参考文献】

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本文编号：257317