当前位置:主页 > 医学论文 > 口腔论文 >

STAT3在CTGF调控人牙髓细胞分化中作用的研究

发布时间:2017-03-04 13:24

  本文关键词:HEMA对人牙髓细胞、成牙本质样细胞中MMPs表达的影响与调控,由笔耕文化传播整理发布。


《河北医科大学》 2015年

STAT3在CTGF调控人牙髓细胞分化中作用的研究

刘从娜  

【摘要】:炎症、外伤等造成的牙髓损伤逐年增多,而现有的临床治疗方法还不能完全再造牙髓或代替牙髓组织的功能。牙髓细胞(Human Dental Plup Cells,h DPCs)是一种具有一定的自我增殖和分化潜力的细胞。以往研究已证实体外培养的牙髓细胞有形成钙化组织的能力,这种能力依赖于有多种生物学效应的细胞因子的调控,即细胞因子能够不同程度的刺激受损的牙髓细胞再生。结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)具有强烈促纤维化的作用,它可以增强牙髓细胞的矿化能力,但不能刺激牙髓细胞增殖,其中作用的分子机制尚不清楚。近年来发现酪氨酸蛋白激酶-信号转导子和转录激活子(Janus protein tyrosine kinase-Signal transducer and activator of transcription,JAK-STAT)通路与炎症反应、细胞增殖、分化等相关。本研究即探讨STAT3是否在CTGF刺激牙髓细胞增殖分化过程中起重要作用。第一部分CTGF在人牙髓细胞增殖、分化过程中的作用目的:体外培养h DPCs,观察CTGF对h DPCs增殖、分化的影响。方法:选取由于正畸或阻生拔除的健康、完整的第三磨牙(均经患者知情同意),在无菌条件下取出牙髓组织,采用组织酶消化法原代培养h DPCs并鉴定来源。采用不同浓度(0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml)的CTGF作用于h DPCs,作用不同时间后,通过甲基噻唑基四唑(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)检测CTGF对h DPCs增殖的影响;茜素红染色观察矿化结节的形成。结果:1组织块酶解法能成功培养出成纤维样细胞,倒置显微镜下可见细胞形态均一,为典型的梭形,胞体丰满,胞浆丰富,细胞核呈圆形或卵圆形位于细胞中央,核仁清晰可见。免疫细胞化学染色结果示波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。2 MTT结果显示CTGF三个浓度(10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml)均对细胞无毒性作用,能促进h DPCs增殖,且随着时间延长作用效果增强,第1天,实验组与对照组没有统计学意义(P0.05),从第3天开始,实验组与对照组有统计学意义(P0.05);茜素红结果显示CTGF组的矿化结节明显高于对照组。结论组织块酶解法能成功分离和培养出h DPCs;一定浓度的CTGF能够促进牙髓细胞增殖和分化。第二部分CTGF对人牙髓细胞中STAT3蛋白表达的影响目的:观察CTGF作用h DPCs后,细胞中STAT3蛋白的表达情况。方法:取第四代h DPCs制成细胞悬液,爬片后随机分为对照组、CTGF处理组、Stattic(STAT3特异性抑制剂)+CTGF处理组,分别培养30min后采用免疫组化SABC法检测中STAT3活性蛋白(磷酸化蛋白,Phos-STAT3)的表达情况。结果:h DPCs培养30 min后,CTGF处理组可见棕色颗粒主要分布在细胞核中,即Phos-STAT3主要在细胞核中表达;对照组相反,棕色颗粒主要分布在细胞质中,Phos-STAT3在胞质中表达,细胞核中无表达;Stattic+CTGF处理组细胞质中棕色颗粒比对照组明显减少,细胞核中无棕色颗粒,Phos-STAT3在细胞质中表达,但表达量比对照组降低。结论:CTGF能明显促进STAT3磷酸蛋白的表达,并诱导Phos-STAT3转移细胞核中表达;Stattic能抑制STAT3蛋白磷酸化。第三部分STAT3在CTGF诱导牙髓细胞分化中的作用目的:Stattic与CTGF联合作用h DPCs后,观察矿化结节以及ALP、OCN、OPN和DMP-1 m RNA表达水平。方法:取第4代人牙髓细胞制成细胞悬液,以104个/ml的浓度接种在6孔板和50 ml培养瓶中,细胞汇合后,将h DPCs随机分为空白对照组、阳性对照组(20ng/ml的CTGF)和实验组(STAT3抑制剂Stattic作用半小时后加入20ng/ml的CTGF),作用7 d、14 d、28 d后,采用茜素红染色观察矿化结节的形成,Real-time PCR法检ALP、OCN、OPN和DMP-1的m RNA表达水平。结果:茜素红结果:与阳性对照组相比,加入Stattic后,矿化结节形成明显减少。PCR结果显示:7天时,加入Stattic后,ALP、OCN、OPN和DMP-1的m RNA表达下降,CTGF组表达增高,差异有统计学意义(P0.05);14天时,加入Stattic后,ALP m RNA表达下降,CTGF组表达增高,差异有统计学意义(P0.05);Stattic组与对照组OCN m RNA表达无统计学意义(P0.05),CTGF组的OCN m RNA表达增高,与其他两组比较有统计学意义(P0.05);Stattic组与对照组OPN m RNA表达无统计学意义(P0.05),CTGF组的OPN m RNA表达降低,较其他两组有统计学意义(P0.05);DMP-1m RNA表达各组比对照组表达都降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:STAT3在CTGF诱导牙髓细胞分化中起重要作用。综上所述,CTGF能促进h DPCs增殖和分化,并且能够激活STAT3通路,使h DPCS中STAT3磷酸化蛋白表达增高,并促进Phos-STAT3转移到细胞核中。这一研究为揭示CTGF促进h DPCs分化的机制以及为临床开展新的牙髓炎症治疗方案提供了实验依据。

【关键词】:
【学位授予单位】:河北医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R781.3
【目录】:

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文? 欢迎:购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式


【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 卢婧;唐荣银;李彦;;人牙髓细胞原代培养方法的比较研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年06期

2 ;Osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells promoted by overexpression of connective tissue growth factor[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2009年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张政;房清敏;;结缔组织生长因子的研究进展[J];滨州医学院学报;2015年01期

2 黄娟;彭依群;;结缔组织生长因子与血管钙化[J];中国动脉硬化杂志;2012年07期

3 刘凤玲;邓旭亮;吴悦梅;唐丽琴;;HPC和L929细胞在修复粘结剂体外毒性评价中灵敏度的比较研究[J];口腔颌面修复学杂志;2010年05期

4 邓力山;毛小波;轩东英;;锁骨颅骨发育不良患者牙髓细胞的生物学特性及超微结构分析[J];解放军医药杂志;2014年10期

5 邓云贞;李珏丹;魏虹;石建峰;李昂;苟建重;;BMP-2促进人炎症牙髓干细胞骨向诱导分化的体外研究[J];口腔生物医学;2015年02期

6 陆家瑜;华丽;张秀丽;邹德荣;;山羊乳牙牙髓细胞体外培养和绿色荧光转染的研究[J];上海口腔医学;2010年05期

7 沈晴昳;;不同原代培养方法培养人牙髓细胞的研究[J];天津医药;2011年02期

8 江龙;朱亚琴;;改良组织块法体外培养人牙周膜细胞和牙髓细胞[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2008年04期

9 ;Osteoinduction by Ca-P biomaterials implanted into the muscles of mice[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2011年07期

10 王萍;王亚平;周玥;杨明聪;;人牙髓细胞的体外培养及生物学特性研究[J];重庆医科大学学报;2011年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 闫雪萍;壳聚糖/磷酸三钙复合组织工程支架材料的制备及其性能研究[D];兰州大学;2011年

2 刘凤玲;电容耦合电刺激对体外人牙髓细胞增殖影响的研究[D];佳木斯大学;2008年

3 贾谦;碱性成纤维细胞因子对牙髓干细胞矿化能力影响及机制研究[D];第四军医大学;2012年

4 田秀芬;转录共调节因子FHL2对人牙髓细胞分化及矿化的调控作用研究[D];山东大学;2013年

5 程东梅;17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究[D];河北医科大学;2013年

6 张晓;IL-8及其受体在人牙髓干细胞的表达及其调控的初步研究[D];第四军医大学;2013年

7 王志华;LPS对人牙髓干细胞增殖定向分化能力的影响及其相关机制的研究[D];第四军医大学;2013年

8 崔力;抑制瞬时受体电位M7通道表达对人牙髓干细胞增殖、迁移及成骨/成牙向分化的影响[D];南方医科大学;2013年

9 张献丽;血管紧张素Ⅱ对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的实验研究[D];河北医科大学;2014年

10 田丽华;P物质对体外培养人牙髓细胞生物学特性的影响[D];河北医科大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吴军正,司徒镇强,陈建元,王为,刘斌;体外培养的人牙龈牙周膜牙髓纤维细胞生长及形态特点[J];实用口腔医学杂志;1993年04期

2 张郁,荫俊,史俊南,肖明振,陈建元,吴军正;人牙髓成纤维细胞等的体外培养、生长特性和鉴定[J];牙体牙髓牙周病学杂志;1991年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王学侠;氟对离体培养的人牙髓细胞的毒性作用[J];国外医学.口腔医学分册;2002年01期

2 杨雪超,樊明文;体外持续培养对人牙髓细胞分化能力的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2003年02期

3 杨春瑜,刘泓,吕行,金晓明,靳占峰,陈鹤;体外培养人牙髓细胞的初步实验观察[J];哈尔滨医科大学学报;2004年04期

4 董文波,吴补领;蟾酥制剂对人牙髓细胞的细胞毒性研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2004年09期

5 段建民;菊地宽高;汪维健;片山直;;血小板血浆对人牙髓细胞增殖的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年04期

6 段建民;汪维健;菊地宽高;;低浓度洗涤血小板促进人牙髓细胞增殖的作用机制探讨[J];实用口腔医学杂志;2006年05期

7 高洁;刘冬娟;刘月华;;大鼠牙髓细胞的分离培养及超微结构观察[J];解剖科学进展;2007年01期

8 张颖丽;姜新朋;张影杰;欧阳红生;;碱性成纤维细胞生长因子对人体外培养牙髓细胞增殖的影响[J];现代口腔医学杂志;2008年02期

9 李政权;李俊;王敏;张红梅;;体外培养的人牙髓细胞表型分析[J];临床口腔医学杂志;2009年03期

10 于清华;高玫梅;韩彦玲;周少云;;酶消化组织块法培养人牙髓细胞[J];哈尔滨医科大学学报;2009年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 邵美瑛;杨惠;程然;程立;胡涛;;内毒素诱导牙髓细胞凋亡及其机制的初步研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年

2 王倩;卢煜;李小玉;周学东;黄定明;;牙髓细胞类型识别受体及炎症体表达的初步探讨[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

3 庄姮;邹晓英;高学军;岳林;;人牙髓细胞体外培养传代过程中的老化表现[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

4 张颖丽;姜新朋;;碱性成纤维细胞生长因子对人体外培养牙髓细胞增殖的影响[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年

5 于清华;;内皮素-1对人牙髓细胞分化的影响[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

6 刘斐;吴补领;高杰;;辛伐他汀对人牙髓细胞的增殖和分化的影响[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

7 李黎;刘娜;刘鲁川;;脉冲Nd:YAG激光照射牙髓断面后对牙髓细胞的影响[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年

8 刘路;韦曦;凌均棨;吴莉萍;;干细胞相关基因在体外培养牙髓细胞的表达[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

9 李志勇;田卫东;陈希哲;闫征斌;;定向诱导人牙髓细胞向牙本质细胞分化的实验研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年

10 龚启梅;凌均棨;蒋宏伟;王劲茗;;促红细胞生成素对牙髓细胞抗炎作用的研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 祁胜财;高迁移率族蛋白B1对人牙髓细胞增殖、迁移和分化的影响[D];华中科技大学;2013年

2 汪平;纤维粘连蛋白与牙髓细胞分化、牙髓组织修复关系的研究[D];第四军医大学;1995年

3 许波;抗菌/抗内毒素多肽葛佬素的表达、纯化及其生物活性的初步研究[D];第四军医大学;2004年

4 赵书芳;内毒素介导的人牙髓细胞损伤及TGF-β、bcl-2调控作用的实验研究[D];第四军医大学;1999年

5 王忠东;人牙髓细胞中差异表达基因的克隆及DPDP-2和DPDP-3基因序列分析[D];第四军医大学;2000年

6 王凤明;TGF-β对人牙髓细胞的作用及p38MAPK信号转导的研究[D];四川大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王雪;IGF-1通过JAK-STAT通路促进牙髓细胞增殖和分化的体外研究[D];河北医科大学;2015年

2 刘从娜;STAT3在CTGF调控人牙髓细胞分化中作用的研究[D];河北医科大学;2015年

3 孙素;HEMA对人牙髓细胞、成牙本质样细胞中MMPs表达的影响与调控[D];昆明医科大学;2015年

4 汤俊岭;过氧化氢对人牙髓细胞氧化还原状态的影响[D];郑州大学;2010年

5 张献丽;血管紧张素Ⅱ对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的实验研究[D];河北医科大学;2014年

6 陈婉;腺病毒介导的钙粘蛋白11基因转染大鼠牙髓细胞的实验研究[D];广西医科大学;2015年

7 于淼;内毒素诱导的人牙髓细胞损伤及黄芩苷保护作用的研究[D];暨南大学;2009年

8 陈雅瑜;辛伐他汀对人牙髓细胞的体外作用及机制研究[D];福建医科大学;2013年

9 刘凤玲;电容耦合电刺激对体外人牙髓细胞增殖影响的研究[D];佳木斯大学;2008年

10 程东梅;17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究[D];河北医科大学;2013年


  本文关键词:HEMA对人牙髓细胞、成牙本质样细胞中MMPs表达的影响与调控,,由笔耕文化传播整理发布。



本文编号:247661

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/247661.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户52c13***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com