人脐带间充质干细胞复合丝素蛋白多孔支架构建组织工程脂肪的实验研究

发布时间：2017-04-30 18:04

  本文关键词：人脐带间充质干细胞复合丝素蛋白多孔支架构建组织工程脂肪的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1.探讨人脐带间充质干细胞(human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,h UCMSCs)的体外分离、培养的方法,观察其生物学特性;2.探讨丝素蛋白多孔支架与h UCMSCs共培养构建组织工程脂肪的可行性。方法:1.从新鲜的人脐带中获取华通氏胶,组织块法提取人脐带间充质干细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,MMT法检测并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面特征性标记,成脂诱导培养21天,油红O染色观察成脂情况;2.h UCMSCs细胞接种于丝素蛋白多孔支架,观察细胞黏附率,MTT法测定及荧光染色观察细胞在支架上的生长情况,成脂诱导培养后RT-PCR检测细胞在支架上的成脂分化能力,将经成脂诱导培养后的细胞支架复合物接种于S-D大鼠体内,观察细胞支架复合物在体内的成脂能力。结果:1.体外培养2周,组织块周围有梭形细胞游出;传代培养至第10代,细胞形态与增殖能力无明显变化;流式细胞仪检测CD44、CD105阳性,CD14、CD34阴性。成脂诱导培养后表明h UCMSCs具有成脂能力,油红O染色见细胞质中有红染的脂滴聚集。2.细胞在丝素蛋白多孔支架上有良好的黏附率,12h后平均黏附率超过80%。MTT法检测显示接种于丝素蛋白多孔支架上的细胞与贴壁培养的细胞生长曲线无统计学差异。荧光倒置相差显微镜下观察到,细胞与丝素蛋白支架共培养1~2天后细胞与支架充分附着,培养7~10天后生长活跃。共培养1周后序贯成脂诱导培养2周,RT-PCR检测细胞Oct-4表达减弱,表达a P2和LPL。将共培养1周序贯成脂诱导培养2周的细胞支架复合物植入S-D大鼠皮下,4周后取出,见有脂肪组织形成;8周后支架降解明显,有新生脂肪组织形成;12周后支架降解完全,脂肪组织形成明显;对照组无明显脂肪组织生成。结论:1.h UCMSCs能在体外培养、扩增及表现间充质干细胞的生物特性;2.h UCMSCs具有向脂肪细胞方向分化的特性,可作为脂肪组织工程的种子细胞;3.丝素蛋白多孔支架与细胞共培养后并未影响细胞的生长及向脂肪方向分化,是一种理想的可降解生物支架,h UCMSCs与丝素蛋白支架共培养后可构建组织工程脂肪。
【关键词】：人脐带间充质干细胞 丝素蛋白多孔支架 组织工程脂肪
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstrast6-9
• 前言9-11
• 第一部分 人脐带间充质干细胞的分离培养及鉴定11-24
• 一．实验材料与主要仪器11-13
• 二．实验方法13-15
• 三．结果15-18
• 四．讨论18-20
• 五．结论20-21
• 参考文献21-24
• 第二部分 人脐带间充质干细胞结合丝素蛋白多孔支架构建组织工程脂肪的研究24-39
• 一．实验材料与主要仪器24-26
• 二．实验方法26-30
• 三．结果30-34
• 四．讨论34-37
• 五．结论37
• 参考文献37-39
• 综述39-50
• 参考文献45-50
• 中英文缩略词表50-51
• 致谢51-52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 颜晓慧,郑磊,洪华容,王前,张晓,俞耀庭;骨组织工程应用可降解聚合物的可能性探讨[J];国外医学.生物医学工程分册;2000年01期

2 曹谊林;;组织工程学的建立与发展[J];组织工程与重建外科杂志;2005年01期

  本文关键词：人脐带间充质干细胞复合丝素蛋白多孔支架构建组织工程脂肪的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：337323