载细菌电纺纤维膜的制备及评价

发布时间：2017-05-02 19:16

  本文关键词：载细菌电纺纤维膜的制备及评价，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：传统的肿瘤治疗方法具有难以克服的缺点,如毒副反应严重、治疗成本高、肿瘤易发生转移等,细菌用于肿瘤治疗显示出治疗方法简单、抗肿瘤效果显著以及容易与其它肿瘤治疗方法进行联用等特点,具有一定的潜力。然而现有的抗肿瘤细菌大多本身具有毒性,常会引起不良以及无法预料的毒副作用。即使采用如Escherichia coli Nissle 1917这样的益生菌,在治疗时,细菌会在体内循坏且其中部分并非定植于肿瘤组织,而存于体内各个脏器中,在长期治疗时不但会加重其它脏器的除菌负担,大量使用时还需注射抗生素以清除多余细菌。本研究旨在将细菌携载于静电纺丝纤维膜中,避免在利用细菌进行肿瘤治疗时,游离细菌对机体造成的伤害和负担。为此,本研究重点考察了将细菌携载在纤维上的不同方式对细菌的影响。在利用水不溶性聚合物制备包裹细菌的电纺纤维时,由于细菌处于密闭空间中,难以考察电纺过程对细菌的影响。通过在同轴静电纺丝时,将氯化钠颗粒加入聚合物溶液中,使得纤维遇水后形成贯通孔,再通过Alamar Blue检测方法,本研究建立了对水不溶性聚合物电纺纤维内细菌活性的定量检测方案。实验结果显示,利用同轴静电纺丝技术将细菌包裹入纤维中后,细菌的活性可以维持在48%,细菌仍然具备繁殖能力和蛋白表达能力；细菌的繁殖能力和蛋白表达能力随着在纤维内培养时间的增长而减弱,这可能是因为纤维内的空间有限所致。本研究利用共价接枝方法和亲和吸附方法将细菌固定在电纺纤维膜的表面时,考察了固定过程对细菌的影响。实验结果显示,无论是共价接枝过程还是亲和吸附过程均未对细菌的活性产生影响；细菌的增殖能力和蛋白表达也未受明显影响,细菌的传代时间在传代5次后回归正常。
【关键词】：Escherichia coli Nissle 1917 电纺 同轴纺丝 活性检测 表面改性 共价接枝 亲和吸附
【学位授予单位】：西南交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-13
• 第1章 绪论13-23
• 1.1 细菌固定化13-15
• 1.1.1 细菌固定的方法13-14
• 1.1.2 细菌固定的载体14
• 1.1.3 细菌固定的应用14-15
• 1.2 静电纺纤维15-18
• 1.2.1 电纺纤维简介15-16
• 1.2.2 芯壳结构静电纺纤维16-17
• 1.2.3 同轴静电纺纤维的原理及研究现状17-18
• 1.3 静电纺纤维的表面改性18-19
• 1.3.1 静电纺纤维的表面改性方法18-19
• 1.3.2 静电纺纤维膜表面改性的应用现状19
• 1.4 细菌在肿瘤治疗中的应用19-22
• 1.4.1 肿瘤细菌治疗的研究现状20
• 1.4.2 肿瘤治疗用细菌的改造20-21
• 1.4.3 ECN的特点及在疾病治疗中的应用21-22
• 1.5 本课题的研究意义与内容22-23
• 第2章 蛋白表达和分泌型EcN菌的构建23-40
• 2.1 实验部分23-32
• 2.1.1 实验材料23-24
• 2.1.2 EcN的培养24
• 2.1.3 pET28a-GFP质粒转化EcN24
• 2.1.4 pe1B-EGFP基因扩增24-26
• 2.1.5 pGEX-4T-1载体改造26-28
• 2.1.6 pGEXM-pe1B-EGFP重组载体的构建28-30
• 2.1.7 pe1B-EGFP在ECN中的表达30-32
• 2.2 结果与讨论32-39
• 2.2.1 转染pET28a-GFP质粒ECN菌的表征32-33
• 2.2.2 pe1B-EGFP基因扩增后的电泳分析33-34
• 2.2.3 pGEX-4T-1载体的PCR鉴定和测序34-36
• 2.2.4 pGEXM-pe1B-EGFP重组载体的鉴定36-37
• 2.2.5 pe1B-EGFP在ECN中的表达37-39
• 2.3 本章小结39-40
• 第3章 静电纺纤维包埋细菌的研究40-50
• 3.1 实验部分40-42
• 3.1.1 实验材料40
• 3.1.2 氯化钠颗粒的制备及表征40-41
• 3.1.3 电纺纤维膜的制备及表征41
• 3.1.4 电纺纤维膜中细菌活率的表征41
• 3.1.5 电纺纤维膜中细菌增殖能力的表征41-42
• 3.1.6 电纺纤维膜中细菌的蛋白表达表征42
• 3.1.7 数据的统计学处理42
• 3.2 结果与讨论42-49
• 3.2.1 载细菌纤维膜的结构与形貌表征42-44
• 3.2.2 电纺纤维中细菌的活率44-47
• 3.2.3 电纺纤维中细菌的生长行为47-48
• 3.2.4 电纺纤维中细菌的蛋白表达48-49
• 3.3 本章小结49-50
• 第4章 电纺纤维膜表面接枝细菌的研究50-63
• 4.1 实验部分50-53
• 4.1.1 实验材料50
• 4.1.2 电纺纤维膜的制备与表征50-51
• 4.1.3 电纺纤维的醛基改性51
• 4.1.4 电纺纤维的糖基改性51
• 4.1.5 改性纤维膜的表征51-52
• 4.1.6 改性纤维膜上接枝细菌52
• 4.1.7 纤维接枝细菌的表征52-53
• 4.1.8 数据的统计学处理53
• 4.2 实验结果分析与讨论53-62
• 4.2.1 电纺纤维膜的形貌表征53-54
• 4.2.2 共价接枝细菌改性纤维的表征54-57
• 4.2.3 亲和吸附细菌改性纤维的表征57-60
• 4.2.4 改性纤维接枝细菌的表征60-62
• 4.3 本章小结62-63
• 全文结论63-64
• 致谢64-65
• 参考文献65-72
• 攻读硕士期间发表论文72-73

【参考文献】

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1 张丽,程虎民,马季铭;非水反相微乳中NaCl纳米粒子的制备[J];物理化学学报;2002年01期

  本文关键词：载细菌电纺纤维膜的制备及评价，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：341548