制备兔颈总动脉脱细胞基质的方法研究

发布时间：2017-05-10 13:18

  本文关键词：制备兔颈总动脉脱细胞基质的方法研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：心血管类疾病严重危害人类身体健康,血管重建在临床上具有十分重要的地位,寻找合适的血管移植物逐渐成为人们关注的重要课题。目前临床上用于血管支架的生物材料包括天然血管、脱细胞基质、人工替代物等。组织工程和再生医学迅猛发展,目前全生物化的异种血管移植已成为热点研究内容。已开发的材料在大中口径血管替代物方面取得较好的效果,但小口径血管(直径小于6mm)的通畅率较低,替代人小动脉的人工血管移植由于内膜增厚、易形成血栓等原因一直未获得满意的效果。临床上急需寻求不易形成血栓的小口径血管替代物。 本实验采用多种去除细胞的方法组合,来制备兔颈总动脉脱细胞血管支架,并对不同方案制备的脱细胞支架进行评价,目的是希望得到制备兔颈总动脉脱细胞血管支架的优化方案。 方法：联合采用物理处理法、化学处理法和酶学处理法去除细胞,制备兔颈总动脉脱细胞血管支架,应用组织染色、电子显微镜、细胞毒性评价以及皮下包埋等方法观察组织工程血管的管壁构建组织学、脱细胞支架的细胞毒性以及免疫原性。 结果：我们组合出三种制备脱细胞血管支架的方案,均能够将兔颈总动脉脱细胞完全,无残存细胞及细胞残片,细胞外基质保存完好,血管支架三维结构保存完好,脱细胞前后的生物力学性能无明显改变,脱细胞的支架具有低细胞毒性和免疫原性。 结论：本实验探寻的几种脱细胞方法所制备的组织工程血管能够比较完全地去除掉血管壁上的细胞,并且能够较完整地保存细胞外基质成分,为组织工程方法制备具有分层结构的组织工程血管的提供参考。
【关键词】：组织工程 血管支架 细胞外基质
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目录7-13
• 第一章 绪论13-29
• 1.1 组织工程学(Tissue engineering)的建立和发展13-14
• 1.2 血管组织工程的建立14-28
• 1.2.1 血管移植进展15-17
• 1.2.2 血管结构17-18
• 1.2.3 血管组织工程的种子细胞18-21
• 1.2.3.1 自体血管壁细胞18-20
• 1.2.3.2 干细胞20-21
• 1.2.4 细胞外基质21-23
• 1.2.5 血管支架材料23-26
• 1.2.5.1 天然生物支架材料24
• 1.2.5.2 高分子支架材料24-25
• 1.2.5.2.1 PLA和PGA24-25
• 1.2.5.2.2 PCL25
• 1.2.5.3 脱细胞的材料25-26
• 1.2.6 信号——合适的生物化学或者生物力学信号26-27
• 1.2.6.1 生化组织重建——异物反应和伤口愈合26
• 1.2.6.2 蛋白吸附26
• 1.2.6.3 巨噬细胞粘附26-27
• 1.2.6.4 异物巨噬细胞形成27
• 1.2.7 ECM重建27
• 1.2.8 组织工程血管重建27-28
• 1.3 立题依据28-29
• 第二章 材料与方法29-39
• 2.1 实验材料29-32
• 2.1.1 实验动物29
• 2.1.2 主要试剂29-30
• 2.1.3 主要仪器30-32
• 2.1.4 细胞株32
• 2.2 研究方法32-39
• 2.2.0 标本采集32
• 2.2.1 脱细胞血管制备32-33
• 2.2.2 包埋33-34
• 2.2.3 石蜡切片34
• 2.2.4 H&E染色34-35
• 2.2.5 Masson三色染色35
• 2.2.6 天狼星红(Sirius Red)染色35-36
• 2.2.7 DAPI细胞核荧光染色36
• 2.2.8 扫描电镜样品制备36
• 2.2.9 缝线耐受力测试36-37
• 2.2.10 爆破压力测试37
• 2.2.11 细胞毒性检测37-38
• 2.2.12 血管皮下包埋手术步骤38
• 2.2.13 统计学方法38-39
• 第三章 实验结果39-52
• 3.1 血管外观39-40
• 3.2 通过HE和DAPI染色比较不同消化方案处理后细胞成分的存留40-42
• 3.3 几套方案所保留的细胞外基质成分比较42-44
• 3.4 扫描电镜观察44-46
• 3.5 机械性能测试46-47
• 3.6 细胞毒性实验47-49
• 3.7 生物相容性实验49-52
• 第四章 讨论52-59
• 4.1 血管材料的选择52-54
• 4.1.1 人工合成材料52-53
• 4.1.2 天然生物材料53-54
• 4.2 脱细胞血管基质的制备方法54-56
• 4.3 本实验的结果分析56-59
• 参考文献59-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张燕搏;姜明;王强;唐秀杰;杨秀滨;胡平;吴清玉;;组织工程血管材料体外细胞毒性评价实验研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年06期

2 ;Tissue engineering of blood vessels with endothelial cells differentiated from mouse embryonic stem cells[J];Cell Research;2003年05期

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本文编号：354851