成纤维细胞联合血管内皮细胞促进脂肪干细胞增殖及成骨分化研究

发布时间：2024-06-30 03:23

　　目的:为进一步优化组织工程骨仿生性能,本研究拟通过将具有优良增殖分化性能、分泌合成胶原能力、含多种调控因子的成纤维细胞(FB)与血管内皮细胞(VECs)联合共培养脂肪间充质干细胞(ADSCs),探讨FB对ADSCs的作用,明确FB是否能加强VECs的直接诱导作用,为解决组织工程骨形成缓慢、血管化缓慢等问题以及临床骨缺损治疗方案提供捷径和新思路。方法:①将血管内皮细胞、成纤维细胞、脂肪干细胞三种细胞株分别体外培养,并通过细胞形态学及表面标记进行检测和鉴定,确定其各自细胞生物学特性;②将细胞分为四组:ADSCs组、ADSCs+VECs共培养组、ADSCs+FB共培养组、ADSCs+VECs+FB共培养组,分别倒置显微镜下观察细胞的形态变化;③CCK-8法绘制出各组细胞的生长曲线,比较各组细胞增殖情况;④共培养第7、14、21、28天各组进行茜素红染色、ALP染色,分别进行定性及定量检测;⑤共培养第3周行Western blot检测各组BMP-2蛋白水平表达;⑥共培养第3周行RT-PCR检测成骨标志基因(ALP、OCN)mRNA的表达,以评估共培养体系的成骨分化能力。结果:①三种细胞的形态及...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２脂肪间充质干细胞（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．?１－２?Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ?（ｘ?１００）??

３．结果??３．１脂肪干细胞的培养与鉴定??１）倒置显微镜下观察细胞形态：稳定传至４周３代后可见大量梭形细胞和多??角细胞，胞体大，核居中（图１－１），呈巢状生长，排列紧凑且规律（图１－２）。??■■Ｉ??＿＿＿??酶纏??图１－１脂肪间充质干细胞（ｘ４０）??Ｆｉｇ．?１－１?....

图１－１脂肪间充质干细胞（ｘ４０）??Ｆｉｇ．?１－１?Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ?（ｘ４０）??

３．结果??３．１脂肪干细胞的培养与鉴定??１）倒置显微镜下观察细胞形态：稳定传至４周３代后可见大量梭形细胞和多??角细胞，胞体大，核居中（图１－１），呈巢状生长，排列紧凑且规律（图１－２）。??■■Ｉ??＿＿＿??酶纏??图１－１脂肪间充质干细胞（ｘ４０）??Ｆｉｇ．?１－１?....

图１－６脂肪间充质干细胞ｖＷＦ免疫荧光染色（－）??Ｆｉ．?１－６?ｖＷＦ?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓａｉｎｉｎｏｆ?ａｄｉｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ－

２）表面抗原鉴定检测：第３代脂肪间充质干细胞免疫荧光检测ＣＤ９０、ＣＤ１０５??染色均为阳性表达（图１－３，?１－４）；?ＣＤ１３３、ｖＷＦ均阴性表达（图１－５，１－６）。??图１－３脂肪间充质干细胞ＣＤ９０免疫荧光染色（＋）??Ｆｉｇ．?１?－３?ＣＤ９０?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ....

图１－３脂肪间充质干细胞ＣＤ９０免疫荧光染色（＋）??Ｆｉ．?１?－３?ＣＤ９０?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｏｆ?ａｄｉｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｍｅｓｅｎｃｈｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ＋

２）表面抗原鉴定检测：第３代脂肪间充质干细胞免疫荧光检测ＣＤ９０、ＣＤ１０５??染色均为阳性表达（图１－３，?１－４）；?ＣＤ１３３、ｖＷＦ均阴性表达（图１－５，１－６）。??图１－３脂肪间充质干细胞ＣＤ９０免疫荧光染色（＋）??Ｆｉｇ．?１?－３?ＣＤ９０?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏ....

本文编号：3998312