微应变环境对组织工程化周围神经功能恢复的影响

发布时间：2017-05-10 22:00

  本文关键词：微应变环境对组织工程化周围神经功能恢复的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1.采用低渗联合冻干技术改良脱细胞神经支架制作方法,并在现有方法的基础上改良兔SCs分离纯化方法,将所得的神经支架和SCs于体外构建新型组织工程化周围神经。2.对体外构建的新型组织工程化周围神经给予不同程度的微应变牵张刺激,通过显微缝合技术植入周围神经缺损动物模型体内,检测其神经功能恢复情况及种子细胞在体内的分子生物学变化。方法:1.在传统化学脱细胞神经支架制作方法基础上对其进行低渗和冷冻干燥处理,并进行HE染色和扫描电镜检测,观察脱细胞是否完全。综合多种SCs分离纯化方法,通过酶消化法获得混有成纤维细胞的原代SCs,利用抗代谢药物Ara-C抑制成纤维细胞的增殖,HRG1-β1修复并刺激初次纯化后的SCs,再结合差速酶法和差速贴壁法对其进一步纯化。用PKH26荧光示踪剂对所得的高纯度SCs进行标记,在体式显微镜下通过显微注射的方法于体外构建新型组织工程化周围神经,并进行HE染色观察SCs在支架内的生长状况。2.将前期体外构建的新型组织工程化周围神经置于Bio Dynamic生物反应舱系统内通过EF3200生物力学实验仪对其进行不同程度的周期性循环牵张微应变刺激(形变量分别为0%、5%、10%和15%)。通过显微缝合技术将不同形变量刺激后的神经支架植入坐骨神经缺损动物模型(缺损长度1cm)体内修复神经缺损。分别于4周和8周通过超声观察支架在体内的形态变化和连续性,于8周时,检测动物模型术侧神经电生理和腓肠肌恢复情况,并取出神经支架进行HE、甲苯胺蓝染色,观察支架内细胞分布及髓鞘计数;S-100、GFAP及NF-200免疫荧光染色并测IOD值。病理切片后观察远端吻合口PKH26荧光示踪情况。结果:1.改良后的脱细胞神经支架HE染色及扫描电镜观察结果显示支架内部髓鞘及SCs均被完全去除,支架内部存在丰富的孔状结构。综合多种SCs分离纯化方法可以快速获得大量增殖活性好的高纯度雪旺细胞。HE染色结果显示SCs在改良支架内存活良好。2.在不同微应变环境下四组不同形变量刺激的神经支架的超声长轴图像可见各组吻合口处神经外膜平滑延续,无断离发生,短轴图像可见神经纤维束的结构清晰完整。肌电图检测结果中10%形变量刺激后的神经支架NCV明显高于其余三种形变量组,且0%、5%、15%形变量刺激组肌电图上可见低电压、多相位的新生电位,10%形变量刺激组可见短时程、高波幅的再生电位。10%形变量组双侧腓肠肌湿重比明显高于其余三种形变量组。植入体内的支架8周时除15%形变量组结构崩解外,0%、5%、10%组支架内部及自体移植组基底层和神经纤维结构完整,呈波浪状分布。10%形变量组髓鞘数目高于0%、5%组,低于自体神经移植组。10%形变量组S-100及GFAP免疫荧光染色IOD值明显高于0%、5%和自体神经移植组,低于空白对照组,NF-200免疫荧光染色IOD值高于0%和5%组,低于自体神经移植组和空白对照组。0%、5%及10%形变量组8周时远端吻合口均可见PKH26红色荧光,15%组呈阴性。结论:适当程度的微应变刺激可促进SCs复合低渗联合冻干处理后的神经支架在实验动物体内修复神经缺损的功能恢复情况。
【关键词】：周围神经 脱细胞神经支架 许旺细胞 微应变环境 生物力学 组织工程
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R651;R318.08
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-14
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、组织工程化周围神经的体外构建实验14-23
• 1.1 对象和方法14-18
• 1.1.1 实验材料和主要试剂、仪器14-16
• 1.1.2 改良同种异体脱细胞神经支架制备16
• 1.1.3 支架组织形态学及扫描电镜观察16
• 1.1.4 兔SCs分离培养并纯化16-17
• 1.1.5 SCs与神经支架体外复合17
• 1.1.6 复合后的神经支架组织形态学观察17-18
• 1.2 结果18-19
• 1.2.1 支架组织形态学及扫描电镜观察结果18
• 1.2.2 兔SCs的形态学观察18-19
• 1.2.3 复合SCs的神经支架组织形态学观察19
• 1.3 讨论19-22
• 1.3.1 神经支架的材料和制备方法19-21
• 1.3.2 高纯度SCs的获取21-22
• 1.4 小结22-23
• 二、微应变环境对组织工程化周围神经功能恢复的影响23-37
• 1.1 对象和方法23-27
• 1.1.1 实验动物和主要试剂、仪器23
• 1.1.2 SCs-支架复合后给予循环牵张应力刺激23-24
• 1.1.3 神经移植修复坐骨神经缺损24-25
• 1.1.4 神经支架超声观察25
• 1.1.5 神经电生理检测25-26
• 1.1.6 腓肠肌湿重比计算26
• 1.1.7 组织形态学及荧光示踪观察26
• 1.1.8 统计学分析26-27
• 1.2 结果27-33
• 1.2.1 神经支架超声观察结果27
• 1.2.2 术后8周神经支架大体观察及神经电生理检查结果27-29
• 1.2.3 腓肠肌湿重比29-30
• 1.2.4 组织形态学及荧光示踪观察30-33
• 1.3 讨论33-35
• 1.4 小结35-37
• 结论37-38
• 参考文献38-43
• 发表论文和参加科研情况说明43-44
• 综述44-65
• 综述参考文献53-65
• 致谢65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 何晶;丁文龙;;雪旺氏细胞在周围神经损伤修复中的作用及其分子机制[J];解剖科学进展;2005年04期

2 ;Biomechanical properties of acellular sciatic nerves treated with a modified chemical method[J];Neural Regeneration Research;2011年04期

  本文关键词：微应变环境对组织工程化周围神经功能恢复的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：355533