miR-15b-5p靶向调控CDK4调节脉络膜黑色素瘤细胞增殖作用的研究

发布时间：2024-04-03 06:02

　　目的:脉络膜黑色素瘤(choroid melanoma,CM)是成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤,其发生发展存在多种机制。其中P16-cyclinD-CDK4/6-RB通路是与细胞周期相关的通路,众多研究表明其激活会促进脉络膜黑色素瘤细胞的增殖。近些年,随着microRNA的研究逐渐增多,已有多种microRNAs被证实参与了脉络膜黑色素瘤的发生发展。根据microRNA的经典作用机制,通过生物信息学网站预测,发现miR-15b-5p与CDK4的3’UTR区域存在序列互补。因此,本研究将探讨miR-15b-5p通过靶向抑制细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达进而发挥负向调节脉络膜黑色素瘤细胞增殖的作用。方法:1、采用CCK8检测CDK4特异性抑制剂Fascaplysiny对人眼侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系(MUM-2B,MUM-2C)细胞增殖的作用。2、采用双荧光素酶报告分析检测miR-15b-5p与CDK4 mRNA的3’UTR区域结合情况。3、使用脂质体分别转染negative control RNA、miR-15b-5p mimics、inhibitor N.C RNA和miR-...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 研究对象和分组
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 CCK-8 检测细胞的增殖能力
        2.3.3 双荧光素酶分析检测miR-15b-5p与 CDK4 的结合情况
        2.3.4 细胞转染
        2.3.5 实时荧光定量PCR
        2.3.6 Western Blot
        2.3.7 细胞周期检测
        2.3.8 统计学分析
3 结果
    3.1 CDK4 特异性抑制剂对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的影响
    3.2 miR-15b-5p对 CDK4 的靶向调控作用
        3.2.1 双荧光素酶报告实验验证miR-15b-5p与 CDK4 的结合情况
        3.2.2 实时荧光定量PCR检测microRNA的转染效率
        3.2.3 Western blot检测CDK4 的蛋白表达量
    3.3 miR-15b-5p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的影响
        3.3.1 CCK-8 检测miR-15b-5p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的影响
        3.3.2 流式细胞术检测miR-15b-5p对脉络膜黑色素瘤细胞周期的影响
4 讨论
5 结论
本论文创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3946829