承载MSCs纳米纤维补片移植治疗心肌梗死和Tβ4过表达对内源性心肌修复的促进作用

发布时间：2023-12-23 17:32

　　目的心肌梗死严重威胁着人们的生命与健康,给家庭和社会带来了沉重的经济负担。迄今为止,对于心肌梗死的治疗尚无理想措施。干细胞移植是目前最有前景的治疗手段,但仍存在移植后细胞存活率低、难以向心肌细胞分化等关键性问题,这严重地影响了干细胞移植治疗的效果。因此,制定有效地干细胞移植治疗措施是亟待解决的首要问题。本研究利用承载MSCs或Tβ4过表达MSCs (Tβ4-MSCs)的纳米纤维补片移植治疗心肌梗死,探讨PG纳米纤维补片和Tβ4过表达对外源性和内源性心肌修复的促进作用及其机制,以期为干细胞移植治疗的深入开展和临床应用提供新思路和可行性实验依据。方法采用高分子材料PCL和天然生物材料明胶静电纺丝制备PG纳米纤维,利用体外三维培养系统评价PG纳米纤维与细胞的相容性。通过建立体外低氧模型模拟体内缺血缺氧微环境,评价低氧和营养剥夺条件下PG对MSCs存活及增殖活性的影响。建立雌性大鼠心肌梗死模型,于梗死后1周移植承载表达GFP的雄性大鼠MSCs的PG纳米纤维补片。移植后4周通过超声心动图检测大鼠心功能变化。用HE和Masson三色染色观察大鼠左心室壁的形态和组织学变化,测量左心室壁厚度。采用CD...

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略词表
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 PG纳米纤维制备及其体外实验研究
    引言
    1 仪器和试剂
        1.1 主要仪器
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 MSCs的分离和培养
        2.2 PG纳米纤维制备及其特性研究
        2.3 PG对细胞生物学特性的影响
        2.4 PG对细胞存活和增殖活性的影响
        2.5 PG对低氧条件下细胞存活及增殖活性的影响
        2.6 统计学处理
    3 结果
        3.1 PG的表面形态特征
        3.2 PG在细胞生物学特性方面的作用
        3.3 PG对细胞存活和增殖活性的促进作用
        3.4 PG对低氧条件下细胞存活和增殖活性的保护作用
    4 讨论
第二部分 PG纳米纤维承载MSCs移植治疗大鼠心肌梗死的实验研究
    引言
    1 仪器和试剂
        1.1 主要仪器
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 纳米纤维干细胞片制备
        2.2 大鼠心肌梗死模型建立与纳米纤维干细胞片移植
        2.3 心功能检测
        2.4 组织学检测
        2.5 免疫组织化学染色
        2.6 移植细胞存活和分化检测
        2.7 内源性干/祖细胞激活和动员的检测
        2.8 PCR检测
        2.9 统计学处理
    3 结果
        3.1 最佳MOI的确定和转染效率
        3.2 纳米纤维干细胞片移植对心功能改善的作用
        3.3 纳米纤维干细胞片移植后左心室壁结构变化
        3.4 纳米纤维干细胞片促进梗死组织的血管新生
        3.5 纳米纤维干细胞片移植后的淋巴管新生变化
        3.6 纳米纤维干细胞片促进梗死组织的心肌再生
        3.7 纳米纤维干细胞片在外源性心肌修复中的作用
        3.8 纳米纤维干细胞片在内源性心肌修复中的作用
    4 讨论
第三部分 PG承载Tβ4过表达MSCs移植对内源性心肌修复的促进作用
    引言
    1 仪器和试剂
        1.1 主要仪器
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 Tβ4基因重组慢病毒表达载体的构建
        2.2 慢病毒转染MSCs
        2.3 Tβ4基因表达检测
        2.4 Tβ4蛋白表达检测
        2.5 纳米纤维干细胞片制备
        2.6 纳米纤维干细胞片移植
        2.7 心功能检测
        2.8 组织学检测
        2.9 免疫组织化学染色
        2.10 统计学处理
    3 结果
        3.1 重组质粒GV205的鉴定
        3.2 慢病毒滴度测定结果
        3.3 转染重组慢病毒载体后MSCs的Tβ4 mRNA表达水平
        3.4 转染重组慢病毒载体后MSCs的Tβ4蛋白表达水平
        3.5 Tβ4过表达对心功能改善的促进作用
        3.6 Tβ4过表达对左心室壁组织结构变化的影响
        3.7 Tβ4过表达对移植细胞存活和分化的作用
        3.8 Tβ4过表达对内源性心肌修复的促进作用及其机制
    4 讨论
全文小结
课题创新性
参考文献
综述
    参考文献
致谢
附录



本文编号：3874211