长效靶向紫杉醇脂质体的制备及其抗肿瘤作用研究

发布时间：2017-05-05 10:17

  本文关键词：长效靶向紫杉醇脂质体的制备及其抗肿瘤作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:长效靶向脂质体具有选择性地靶向于肿瘤细胞受体位点,提高肿瘤细胞对药物的摄取,降低药物在正常组织的蓄积及延长药物半衰期等优点。因此本论文旨在利用项目组自主制备的雌酮靶向片段,研制一种能够特异性靶向于乳腺癌细胞表面过度表达的雌激素受体的长效靶向紫杉醇脂质体,提高紫杉醇的肿瘤靶向性及治疗效果。并对该制剂的表征、体外靶向性、体内靶向性以及体外、体内抗肿瘤效果进行研究。方法:(1)采用高效液相色谱法建立紫杉醇的含量测定方法,并进行方法学验证;采用薄膜水化法制备4种不同紫杉醇脂质体制剂,即紫杉醇普通脂质体(L-PTX)、紫杉醇靶向脂质体(ES-L-PTX)、紫杉醇长效脂质体(SSL-PTX)和紫杉醇长效靶向脂质体(ES-SSL-PTX)。分别对这四种脂质体制剂进行表征研究:通过透射电镜观察脂质体形态,动态光散射粒径分析仪测定粒径分布和Zeta电位,采用低速离心法测定脂质体包封率及载药量,并考察脂质体在不同温度下储藏的稳定性。(2)通过荧光显微镜观察MCF-7细胞对加载了罗丹明荧光染料的四种脂质体制剂的摄取情况,以此验证长效靶向脂质体体外靶向作用。为观察长效靶向脂质体进入细胞的途径,通过加入不同细胞内吞抑制剂并在荧光显微镜下观察MCF-7细胞对长效靶向脂质体的摄取情况而进行内吞机制的评价。(3)以MCF-7细胞荷瘤裸鼠为模型,注射DiR脂质体进行活体成像实验以验证长效靶向脂质体在动物体内的靶向作用。(4)为考察紫杉醇长效靶向脂质体的抗肿瘤特性,采用MTT比色法分别对紫杉醇和四种紫杉醇脂质体制剂的细胞毒作用进行测定。(5)选取MCF-7细胞荷瘤小鼠模型尾静脉注射不同紫杉醇制剂进行体内抗肿瘤作用研究。结果:(1)本文成功制备出L-PTX、ES-L-PTX、SSL-PTX和ES-SSL-PTX四种紫杉醇脂质体,粒径在120nm~140nm范围,PDI在0.1~0.2范围内,粒径分布范围窄,脂质体带有一定负电荷。包封率在86.0%~88.0%之间,载药量为6.1%~7.5%范围内,具有较高的包封率和载药量,能够满足临床给药浓度的需求,且在4℃条件下储存48h内稳定;(2)脂质体体外靶向性的研究结果证实ES-L-RhB和ES-SSL-RhB均对MCF-7细胞具有主动靶向作用,且ES-SSL-RhB具有长效作用。加入游离ES作为竞争性抑制剂进行靶向作用研究,实验结果确定了ES-SSL-RhB通过雌激素受体介导的内吞作用进入细胞的推论。内吞机制研究结果表明,除受体介导的内吞作用外,巨胞饮和小窝蛋白依赖的内吞作用是长效靶向脂质体进入细胞的主要途径;(3)脂质体体内靶向性结果表明ES-SSL-DiR在肿瘤中的荧光强度显著强于SSL-DiR,证明ES-SSL-DiR的确具有靶向作用,可以快速地、特异性地识别肿瘤表面过表达的雌激素受体,显著增加药物在肿瘤部位的积累量。(4)体外抗肿瘤实验结果表明前期工作制备的五种紫杉醇制剂对MCF-7细胞的毒性作用由强到弱依次为:ES-SSL-PTX、SSL-PTX、ES-L-PTX、L-PTX、PTX,ES-SSL-PTX的抗肿瘤效果显著高于其他四种制剂。(5)体内抗肿瘤实验结果证明ES-SSL-PTX作为紫杉醇的药物载体,能够增强紫杉醇抗肿瘤活性,降低紫杉醇的毒副作用,具有更强的抑瘤效果。结论:本论文成功制备的长效靶向紫杉醇脂质体制剂(ES-SSL-PTX)具有长循环作用可以增加紫杉醇在肿瘤细胞内的积累;此脂质体制剂能够特异性主动靶向于人乳腺癌细胞表面上高表达的雌激素受体,由此可以促进肿瘤细胞对紫杉醇的摄取量,显著提高抗肿瘤疗效并降低毒副作用。因此,本论文研制的长效靶向紫杉醇脂质体制剂(ES-SSL-PTX)是一种可应用于临床,对乳腺癌治疗具有巨大潜力的新型靶向抗肿瘤给药载体系统。
【关键词】：紫杉醇 脂质体 靶向 雌激素受体 乳腺癌 抗肿瘤
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943;R96
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩略词表11-12
• 第1章 绪论12-22
• 1.1 乳腺癌简介12
• 1.2 乳腺癌的治疗12-13
• 1.3 紫杉醇制剂研究进展13-16
• 1.3.1 紫杉醇胶束制剂14
• 1.3.2 水溶性前体药物14
• 1.3.3 乳剂14-15
• 1.3.4 人血清白蛋白纳米粒15-16
• 1.3.5 脂质体16
• 1.4 脂质体研究进展16-19
• 1.4.1 被动靶向脂质体——空间稳定脂质体17-18
• 1.4.2 主动靶向脂质体——配体靶向脂质体18-19
• 1.5 雌激素受体19-20
• 1.6 立题依据20-22
• 第2章 脂质体制备及表征22-33
• 2.1 实验仪器与试剂22-23
• 2.1.1 实验仪器22
• 2.1.2 实验试剂22-23
• 2.1.3 试剂配制23
• 2.2 实验方法23-25
• 2.2.1 紫杉醇高效液相检测方法的建立23-24
• 2.2.2 紫杉醇脂质体的制备24
• 2.2.3 紫杉醇脂质体表征研究24-25
• 2.3 实验结果及讨论25-32
• 2.3.1 紫杉醇高效液相检测方法的建立25-28
• 2.3.2 紫杉醇脂质体表征28-32
• 2.4 结论32-33
• 第3章 脂质体靶向性研究33-51
• 3.1 实验仪器与试剂33-35
• 3.1.1 实验仪器33
• 3.1.2 实验试剂33-34
• 3.1.3 实验用肿瘤细胞系34
• 3.1.4 实验用动物34
• 3.1.5 试剂配制34-35
• 3.2 实验方法35-38
• 3.2.1 细胞培养35
• 3.2.2 脂质体体外靶向性验证35-37
• 3.2.3 脂质体内吞机制研究37
• 3.2.4 脂质体体内靶向性验证37-38
• 3.3 实验结果及讨论38-49
• 3.3.1 脂质体体外靶向性验证38-45
• 3.3.2 脂质体内吞机制研究45-47
• 3.3.3 脂质体体内靶向性研究结果47-49
• 3.4 小结49-51
• 第4章 脂质体抗肿瘤作用研究51-59
• 4.1 实验仪器与试剂51-52
• 4.1.1 实验仪器51
• 4.1.2 实验试剂51
• 4.1.3 实验用肿瘤细胞系51-52
• 4.1.4 实验用动物52
• 4.1.5 试剂配制52
• 4.2 实验方法52-53
• 4.2.1 细胞培养52
• 4.2.2 体外抗肿瘤作用研究52-53
• 4.2.3 体内抗肿瘤作用研究53
• 4.3 实验结果及讨论53-57
• 4.3.1 体外抗肿瘤作用研究结果53-56
• 4.3.2 体内抗肿瘤作用研究结果56-57
• 4.4 小结57-59
• 结论59-61
• 参考文献61-66
• 作者简介66-67
• 致谢67

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