PEG化FGFR3靶向免疫脂质体的制备及表征

发布时间：2017-05-06 19:14

  本文关键词：PEG化FGFR3靶向免疫脂质体的制备及表征，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)是FGFR家族的一员,在细胞的增殖分化中起到重要的调节作用,与许多肿瘤的发生存在着密切的关系,已成为肿瘤治疗的一个潜在靶点。本课题中,我们设计了一种靶向FGFR3且带有半胱氨酸残基的单链抗体(single chain fragment variable,Sc Fv),并使其与脂质体制备原料偶联,制备成为免疫脂质体,从而达到药物对肿瘤的靶向递送。我们通过PCR扩增目的基因,通过分子生物学手段构建p ET-20b-Sc Fv-Cys重组质粒,并在大肠杆菌内完成可溶性表达。经镍亲和层析柱纯化,得到纯度95%的目的蛋白,产量可达每升菌液10mg以上。然后在氮气保护的条件下完成Sc Fv-Cys与脂质体制备原料mal PEG2000-DSPE的偶联,获得Sc Fv-PEG2000-DSPE。采用旋转蒸发成膜和超声的方法制备脂质体和免疫脂质体,经滤膜过滤筛选后,利用激光粒度分析仪和电子显微镜检测,显示脂质体有较好的粒径和形态。最后,通过荧光脂质体转染实验,显示免疫脂质体对FGFR3高表达的膀胱癌细胞RT112有较明显的靶向效果,而阴性对照T24细胞没有明显的靶向效果,证明免疫脂质体的制备成功。综上所述,我们成功制备了一种PEG化的靶向FGFR3的免疫脂质体,并对其表征,证明了它的靶向效果。作为一个新型的药物靶向递送系统,其在肿瘤治疗和药物的开发方面具有良好的应用前景。
【关键词】：成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3) 单链抗体 免疫脂质体 药物靶向递送系统
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-6
• 英文缩略词6-9
• 第1章 绪论9-13
• 1 成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体9
• 2 单链抗体及其表达系统9-10
• 3 肿瘤靶向系统的药物选择10-11
• 4 脂质体和免疫脂质体11
• 5 课题设计思路11-13
• 第2章 材料与方法13-29
• 1 实验材料13-17
• 1.1 主要生化和分子生物学试剂13-14
• 1.2 器材和主要仪器14-16
• 1.3 细胞16
• 1.4 质粒及载体16
• 1.5 实验室常用溶液16-17
• 2 实验方法17-29
• 2.1 pET-20b-ScFv-Cys表达载体的建立17-22
• 2.2 单链抗体ScFv-Cys的诱导表达22-23
• 2.3 单链抗体ScFv-Cys蛋白的纯化及鉴定23-25
• 2.4 脂质体及免疫脂质体的制备及表征25-27
• 2.5 脂质体及免疫脂质体的靶向效果研究27-29
• 第3章 实验结果29-38
• 1 pET-20b-ScFv-Cys表达载体的建立29-30
• 2 单链抗体ScFv-Cys的表达30-32
• 3 单链抗体ScFv-Cys的纯化及鉴定32-33
• 4 脂质体及免疫脂质体的制备和表征33-36
• 5 脂质体及免疫脂质体靶向效果研究36-38
• 第4章 讨论38-42
• 参考文献42-45
• 作者简介及在校期间科研成果45-46
• 致谢46-47
• 附录47-48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 秦海艳;毛晓燕;乔玉玲;李晓进;赵红;;单链抗体的研究进展[J];现代生物医学进展;2011年04期

2 杨彤;;新型脂质体的研究进展[J];医药导报;2009年03期

3 韩萨茹拉;高爱琴;李金泉;张燕军;梅步俊;;成纤维细胞生长因子(FGF)研究进展[J];安徽农业科学;2009年07期

4 苏楠;陈林;;FGFR3在骨骼发育和疾病中作用的研究进展[J];国际遗传学杂志;2006年03期

  本文关键词：PEG化FGFR3靶向免疫脂质体的制备及表征，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：348997