盐酸贝那普利乐卡地平片毒代动力学研究

发布时间：2017-05-19 17:16

  本文关键词：盐酸贝那普利乐卡地平片毒代动力学研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：盐酸贝那普利乐卡地平片为新的复方降压药。本课题采用目前国内外新药临床前安全性评价研究模式对该药进行了临床前毒代动力学研究。课题通过建立同时测定血浆中贝那普利、活性代谢物贝那普利拉及乐卡地平浓度的HPLC-MS/MS测定方法,对盐酸贝那普利乐卡地平片在大鼠和犬体内的毒代动力学进行系统研究,考察长期给药药物在体内是否蓄积,为该复方制剂的研究开发提供依据。目的1.建立灵敏度高、专属性强、高通量的HPLC-MS/MS分析方法,同时测定血浆中贝那普利、贝那普利拉及乐卡地平的浓度。2.检测盐酸贝那普利乐卡地平重复给药在Beagle犬和大鼠体内的暴露和蓄积情况,结合出现的毒性反应,预测临床毒性靶器官、确定无毒反应剂量、毒性反应剂量等,并与单方制剂进行比较。方法1.血浆样品采用乙腈沉淀蛋白法处理。选用格列齐特和乌苯美司为内标。色谱柱为Poroshell 120 SB-C1 (3.0×100 mm 2.7-Micron);流动相：0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),采用梯度洗脱,梯度：0～1.5 min, A:65%; 2min, A:30%; 2～4.5 min, A:30%; 5 min, A:65%; 5～6.5 min, A:65%;流速：0.5 mL/min;柱温30℃。ESI源,正离子模式。多反应监测(MRM)模式,贝那普利m/z 425.3→351.1,贝那普利拉m/z 397.1→351.1,乐卡地平m/z 612.3→280.2,内标格列齐特m/z 324.1→127.2,乌苯美司m/z 309.2→119.9。2.研究采用直接给予原料药的方法进行,盐酸乐卡地平与盐酸贝那普利的原料比为1：3,剂量表示为(盐酸乐卡地平+盐酸贝那普利)。Beagle犬经口给予盐酸贝那普利乐卡地平(6+18)、(20+60)、(60+180) mg/kg/d、单方盐酸乐卡地平60 mg/kg/d和单方盐酸贝那普利180 mg/kg/d,每周给药6天,每天给药1次,连续给药39周。在给药后第1和274天时取血。取血点为药前及药后0.33、0.67、1、2、3、4、7、10、13、24和36 h。大鼠灌胃给予盐酸贝那普利乐卡地平(4+12)、(13+39)、(40+120)mg/kg/d、单方盐酸乐卡地平40 mg/kg/d和单方盐酸贝那普利120 mg/kg/d,每周给药6天,每天给药1次,连续给药26周。在给药第1和183天时取血。取血点为药前及药后0.25、0.5、1、2、3、5、7、9、12和24 h。采用HPLC-MS/MS测定Beagle犬血浆中乐卡地平、贝那普利及其活性代谢产物贝那普利拉的浓度,采用DAS2.1.1实用药代动力学程序计算其药动学参数。结果1.Beagle犬方法学验证结果：贝那普利、贝那普利拉和乐卡地平的线性范围分别为12～12000 ng/mL、12～12000 ng/mL和0.6～600 ng/mL。贝那普利、贝那普利拉和乐卡地平的定量下限分别为12、12、0.6ng/mL。日内日间精密度RSD均小于15%,犬血浆样品-80℃放置162天及处理后室温放置17h稳定。贝那普利回收率90.2%-96.8%,基质效应94.5%～103.8%,贝那普利拉回收率79%-82.7%,基质效应94.7%-104.4%,乐卡地平回收率87.5%～103.0%,基质效应97.55%-107.8%。2.大鼠血浆方法学验证结果：贝那普利、贝那普利拉和乐卡地平的线性范围分别为0.8～800 ng/mL、12～12000 ng/mL和1.5～1350 ng/mL。贝那普利、贝那普利拉和乐卡地平的定量下限分别为0.8、12、1.5 ng/mL。日内日间精密度RSD均小于15%,大鼠血浆样品-80℃放置149天稳定。3. Beagle犬口服给予盐酸贝那普利乐卡地平(6+18) mg/kg/d,动物无异常反应,(20+60)、 (60+180) mg/kg/d剂量与盐酸乐卡地平60 mg/kg/d、盐酸贝那普利180mg/kg/d出现稀便、呕吐、食量减少、牙龈增生；ALT、 TBIL、 TG升高,尿液胆红素阳性；肾脏肾小管扩张,上皮细胞扁平。与两单方组比较,组方后盐酸贝那普利乐卡地平未出现新的毒性反应,表现为盐酸贝那普利乐卡地平高剂量可导致部分犬肝脏和肾脏出现组织病理学的改变。Beagle犬第一天给药后,盐酸贝那普利乐卡地平(6+18)、 (20+60)、 (60+180) mg/kg/d三个剂量组贝那普利的AUCo-t分别为：4276.6±2636.3、2343.6±3319.9、 35643.0±7163.1 μg/L·h;贝那普利拉的AUCo-t分别为：22171.3±8448.2, 70660.1±23362.9、409848.3±98893.7 μg/L·h;乐卡地平的AUCo-t分别为：125.6±+79.9、 283.9±162.3、662.2±319.3 μg/L·h。单方盐酸乐卡地平60 mg/kg/d乐卡地平的AUCo-t为：369.1±298.1 μg/L·h。单方盐酸贝那普利180 mg/kg/d,贝那普利的AUCo-t为：27031.9±9235.4 μg/L·h;贝那普利拉的AUCo-t为：284450.5±86289.2 μg/L·h。第274天给药后,盐酸贝那普利乐卡地平(6+18)、 (20+60)、(60+180) mg/kg/d三个剂量组贝那普利的AUCo-t分别为：3837.9±1944.7、14498.2±7456.1、 33241.2±9815.2 μg/L·h;贝那普利拉的AUC0-t分别为：10086.6±2432.0, 60389.8±34442.9,280135.8±72457.3 μg/L·h。乐卡地平的AUCo-t分别为：130.3±104.2、 790.9±386.1、1853.7±1427.5 μg/L·h。单方盐酸乐卡地平60 mg/kg/d乐卡地平的AUC0-t为：1939.1±1649.4 μg/L·h。单方盐酸贝那普利180 mg/kg/d,贝那普利的AUCo-t为：30629.9±5465.9 μg/L·h;贝那普利拉的AUCo-t为：237418.4±66054.8 μg/L·h。((6+18)、(20+60)和(60+180) mg/kg)三个剂量和单方盐酸贝那普利(180mg/kg/d)、单方盐酸乐卡地平(60 mg/kg/d),给药274天与首次给药贝那普利AUC比值分别为1.0、1.3、1.0和1.3；贝那普利拉AUC比值分别为0.5、1.0、0.7和0.9；乐卡地平AUC比值分别为1.1、3.7、3.9和10.5。4.大鼠口服给予盐酸贝那普利乐卡地平(4+12) mg/kg/d,动物无异常反应,(13+39) (40+120) mg/kg/d剂量与盐酸乐卡地平40 mg/kg/d、盐酸贝那普利120mg/kg/d均可导致血液生化指标异常；复方降压药JY17 (40+120) mg/kg/d、盐酸乐卡地平40 mg/kg/d剂量可引起SD大鼠肾脏组织病理学改变。贝那普利在大鼠体内快速转化为活性代谢产物贝那普利拉,血浆中几乎检测不到原形药物贝那普利。大鼠第一天给药后,盐酸贝那普利乐卡地平(4+12)、(13+39)、(40+120) mg/kg/d三个剂量组贝那普利拉的AUCo-t分别为：109.6±6609、 30954.7±14906.、 97434.9±18599.8 μg/L·h;乐卡地平的AUCo-t分别为：1653.7±540.7、4391.4±1506.7、12553.9±3143.6 μg/L·h。单方盐酸乐卡地平40 mg/kg/d乐卡地平的.AUCo-t为：17302.5±4095.5μg/L·h。单方盐酸贝那普利120mg/kg/d,贝那普利拉的AUCo-t为：42329.7±15679.7 μg/L·h。第183天给药后,盐酸贝那普利乐卡地平(4+12)、(13+39)、(40+120) mg/kg/d三个剂量组贝那普利拉的AUCo-t分别为：17849.5±6241.5、41423.6±13415.3、 101125.6±23839.8μg/L·h;乐卡地平的AUCo-t分别为：1509.2±786.2、 6444.4±1068.1、 19625.2±6899.2 μg/L·h。单方盐酸乐卡地平40 mg/kg/d乐卡地平的AUCo-t为：18579.1±3855.2 μg/L·h。单方盐酸贝那普利120 mg/kg/d,贝那普利拉的AUC0-t为：114166.6±22773.8 μg/L·h。((4+12)、(13+39)和(40+120) mg/kg)三个剂量和单方盐酸贝那普利(120mg/kg/d)、单方盐酸乐卡地平(40mg/kg/d),给药183天与首次给药贝那普利拉AUC比值分别为1.8、1.3、1.0和2.7；乐卡地平AUC比值分别为0.9、1.5、1.6和1.1。结论1.本法的精密度、准确度、专属性和定量线性范围均符合体内药物分析的要求。该方法适合盐酸贝那普利乐卡地平片毒代动力学试验研究。2.盐酸贝那普利乐卡地平片在Beagle犬和大鼠体内均呈线性动力学过程。Beagle犬连续274天口服盐酸贝那普利乐卡地平后贝那普利和贝那普利活性代谢产物贝那普利拉在Beagle犬体内均不引起蓄积；乐卡地平剂量大于6 mg/kg/d时在Beagle犬体内可能引起蓄积。高剂量乐卡地平可以起贝那普利、贝那普利拉暴露量的增加。大鼠连续183天灌胃给予盐酸贝那普利乐卡地平后贝那普利、贝那普利活性代谢产物贝那普利拉及乐卡地平在大鼠体内均不引起蓄积。高剂量乐卡地平可以引起贝那普利拉暴露量的增加,高剂量贝那普利可降低乐卡地平暴露量。
【关键词】：贝那普利 乐卡地平 毒代动力学 高效液相色谱质谱联用仪 大鼠 比格犬
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要10-14
• ABSTRACT14-18
• 缩略语说明18-20
• 前言20-22
• 第一部分 生物样品中贝那普利、贝那普利拉和乐卡地平定量分析方法的建立与确证22-50
• 1 实验仪器与试剂22
• 1.1 主要仪器22
• 1.2 主要试剂22
• 2 实验方法22-26
• 2.1 标准溶液配制22-25
• 2.1.1 贝那普利、贝那普利拉及乐卡地平储备液配制22-23
• 2.1.2 测定犬血浆样本标准系列溶液配制23-24
• 2.1.3 测定大鼠血浆样本标准系列溶液配制24-25
• 2.1.4 测定犬血浆样本内标溶液配制25
• 2.1.5 测定大鼠血浆样本内标溶液配制25
• 2.2 样本分析25-26
• 2.2.1 色谱条件25
• 2.2.2 质谱条件25-26
• 2.2.3 犬血浆样品预处理26
• 2.2.4 大鼠血浆样品预处理26
• 3 犬血浆样本测定方法确证26-41
• 3.1 方法的选择性26-31
• 3.2 标准曲线31-32
• 3.3 定量下限32-33
• 3.4 方法精密度与准确度33-36
• 3.5 稳定性试验36-38
• 3.6 基质效应38-40
• 3.7 回收率40-41
• 4 大鼠血浆样本测定方法确证41-48
• 4.1 方法的选择性41-43
• 4.2 标准曲线43-44
• 4.3 定量下限44-45
• 4.4 方法精密度与准确度45-47
• 4.5 稳定性试验47-48
• 5 讨论48-49
• 5.1 质谱条件的优化48-49
• 5.2 色谱条件的优化49
• 5.3 血浆样本处理方法的优化49
• 6 结论49-50
• 第二部分 盐酸贝那普利乐卡地平片犬重复给药毒代动力学研究50-79
• 1 实验材料50-51
• 1.1 仪器和试剂50
• 1.2 供试品50
• 1.3 实验动物与饲养环境50-51
• 2 实验方法51-52
• 2.1 动物分组与给药51
• 2.2 毒性反应考察51
• 2.3 样本采集51
• 2.4 样本测定51-52
• 2.5 数据处理52
• 3 结果52-77
• 3.1 毒性考察52-53
• 3.2 毒代动力学结果53-77
• 3.2.1 Beagle犬重复给药贝那普利、贝那普利拉及乐卡地平血药浓度数据53-66
• 3.2.2 Beagle犬重复给药贝那普利、贝那普利拉及乐卡地平血药浓度曲线66-69
• 3.2.3 Beagle犬重复给药贝那普利、贝那普利拉及乐卡地平主要动力学参数69-73
• 3.2.4 Beagle犬重复给药各组别首次、末次给药后药时曲线下面积比较73-77
• 4 讨论77-78
• 5 结论78-79
• 第三部分 盐酸贝那普利乐卡地平片大鼠重复给药毒代动力学研究79-96
• 1 实验材料79
• 1.1 仪器和试剂79
• 1.2 供试品79
• 1.3 实验动物与饲养环境79
• 2 实验方法79-81
• 2.1 动物分组与给药79-80
• 2.2 毒性反应考察80
• 2.3 样本采集80
• 2.4 样本测定80
• 2.5 数据处理80-81
• 3 结果81-95
• 3.1 毒性考察81
• 3.2 毒代动力学结果81-95
• 3.2.1 大鼠重复给药贝那普利、贝那普利拉及乐卡地平血药浓度数据81-84
• 3.2.2 大鼠重复给药贝那普利拉及乐卡地平血药浓度曲线84-86
• 3.2.3 大鼠重复给药贝那普利拉及乐卡地平主要动力学参数86-91
• 3.2.4 大鼠重复给药各组别首次、末次给药后药时曲线下面积比较91-95
• 4 讨论95
• 5 结论95-96
• 全文结论96-97
• 参考文献97-99
• 致谢99-100
• 攻读硕士学位期间发表的论文100-101
• 附件101

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 汪志华,陈万春,金惠根;新型钙离子拮抗剂乐卡地平[J];国外医学.心血管疾病分册;2005年02期

2 张玉平;赵伟平;王翼凤;李瑾;杨雪莲;苏锦兴;;贝那普利联合乐卡地平治疗原发性高血压的疗效与安全性[J];实用药物与临床;2012年06期

3 孙琳;;高血压合并糖尿病患者降压用药情况分析[J];医学信息(上旬刊);2011年09期

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本文编号：379300