黑色素生成抑制肽的设计、筛选及作用机制探究
发布时间：2024-03-22 22:40
黑色素是在黑色素细胞中经酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)催化氧化合成的一种高分子的复杂复合物,其含量和分布决定了皮肤所呈现出来的颜色。虽然皮肤中的黑色素有一定的保护细胞免受紫外线引起的DNA损伤的作用,但是黑色素异常的产生和积累会导致一些常见的色素异常沉着病症,包括晒斑,黄褐斑,炎症后的皮肤色素沉着过度甚至是黑色素瘤的发生,对人们构成严重的美学和健康问题。因此,如何预防和治疗皮肤的过度色素沉着已经成为该研究领域的重要课题,具有巨大的使用价值和经济价值。相比不良反应诸多的天然植物成份及人工合成的黑色素抑制剂,近年来短肽类抑制剂以其高效能、低毒性等特点受到越来越多的重视。但是相比化学小分子,不佳的透皮生物利用度极大限制了其临床及商业应用。本研究首先分析研究了肽类黑色素抑制剂的构效关系,进而从实验室已建立的抗氧化肽库中选择优势最高的5条作为模板,设计出一系列的改造短肽抑制剂。随后,通过体外多种药效及毒理模型验证,及体内豚鼠皮肤黑色素沉着抑制模型的筛选,最终得到最佳的候选短肽Ansin-2(TRCFRVCS),仅含有8个氨基酸残基,Ansin-2具有极强的抗氧化活性,可以有效抑制细胞内...
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
1.1 皮肤结构与黑色素合成
1.1.1 皮肤结构
1.1.2 黑色素的生物合成
1.1.3 紫外线与黑色素合成调控
1.2 常见黑色素生成抑制剂
1.2.1 酪氨酸酶抑制剂
1.2.2 抗氧化剂还原黑色素中间体
1.2.3 抑制黑色素小体转运
1.2.4 加快黑色素在角质层的降解或角质脱落
1.3 蛋白多肽的生物利用系统
1.3.1 口服给药系统
1.3.2 透皮给药系统
1.3.3 其他给药系统
1.4 研究意义
2 抑制黑色素生成短肽的分子设计与优化
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 实验材料与试剂
2.2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 短肽的分子设计
2.3.2 短肽的化学合成
2.3.3 抗氧化活性测定
2.3.4 酪氨酸酶抑制活性测定
2.3.5 改造肽对酪氨酸酶抑制的时间效应曲线测定
2.3.6 细胞的培养和传代
2.3.7 细胞毒性检测
2.3.8 溶血活性检测
2.3.9 数据统计分析
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 改造肽的序列和理化参数
2.4.2 改造肽的抗氧化活性结果与分析
2.4.3 改造肽的酪氨酸酶抑制活性结果与分析
2.4.4 酪氨酸酶抑制的时间效应曲线分析
2.4.5 细胞毒性及溶血性
2.5 本章小结
3.InVitro改造肽对黑色素合成的影响
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 实验材料与试剂
3.2.2 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 细胞的培养和传代
3.3.2 检测改造肽对B16细胞酪氨酸酶活性的影响
3.3.3 检测改造肽对B16细胞内黑色素含量的影响
3.3.4 数据统计分析
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 改造肽对B16细胞内酪氨酸酶活性的抑制效果
3.4.2 改造肽对B16细胞内黑色素含量的影响
3.5 本章小结
4 Invivo Ansin-2对UVB诱导的皮肤色素沉着的影响
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 实验耗材与试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 Ansin-2预防UVB诱导的色素沉着能力检测
4.3.2 Ansin-2修复UVB诱导的色素沉着能力检测
4.3.3 Ansin-2的透皮吸收利用度评价
4.3.4 数据统计分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 Ansin-2对UVB诱导的皮肤色素沉着的保护作用
4.4.2 Ansin-2对UVB诱导的皮肤色素沉着的修复作用
4.4.3 Ansin-2的透皮吸收利用度评价
4.5 本章小结
5 Ansin-2的作用机制探究与毒理评价
5.1 引言
5.2 材料与仪器
5.2.1 实验材料与试剂
5.2.2 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 细胞的培养和传代
5.3.2 Westernblotting
5.3.3 Ansin-2与酪氨酸酶分子对接模拟
5.3.4 肥大细胞脱颗粒实验
5.3.5 数据统计分析
5.4 实验结果与讨论
5.4.1 抑制黑色素生成的信号通路研究
5.4.2 Ansin-2与酪氨酸酶分子相互作用的结构模拟分析
5.4.3 Ansin-2的免疫原性检测
5.5 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
本文编号：3935056
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
1.1 皮肤结构与黑色素合成
1.1.1 皮肤结构
1.1.2 黑色素的生物合成
1.1.3 紫外线与黑色素合成调控
1.2 常见黑色素生成抑制剂
1.2.1 酪氨酸酶抑制剂
1.2.2 抗氧化剂还原黑色素中间体
1.2.3 抑制黑色素小体转运
1.2.4 加快黑色素在角质层的降解或角质脱落
1.3 蛋白多肽的生物利用系统
1.3.1 口服给药系统
1.3.2 透皮给药系统
1.3.3 其他给药系统
1.4 研究意义
2 抑制黑色素生成短肽的分子设计与优化
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 实验材料与试剂
2.2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 短肽的分子设计
2.3.2 短肽的化学合成
2.3.3 抗氧化活性测定
2.3.4 酪氨酸酶抑制活性测定
2.3.5 改造肽对酪氨酸酶抑制的时间效应曲线测定
2.3.6 细胞的培养和传代
2.3.7 细胞毒性检测
2.3.8 溶血活性检测
2.3.9 数据统计分析
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 改造肽的序列和理化参数
2.4.2 改造肽的抗氧化活性结果与分析
2.4.3 改造肽的酪氨酸酶抑制活性结果与分析
2.4.4 酪氨酸酶抑制的时间效应曲线分析
2.4.5 细胞毒性及溶血性
2.5 本章小结
3.InVitro改造肽对黑色素合成的影响
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 实验材料与试剂
3.2.2 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 细胞的培养和传代
3.3.2 检测改造肽对B16细胞酪氨酸酶活性的影响
3.3.3 检测改造肽对B16细胞内黑色素含量的影响
3.3.4 数据统计分析
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 改造肽对B16细胞内酪氨酸酶活性的抑制效果
3.4.2 改造肽对B16细胞内黑色素含量的影响
3.5 本章小结
4 Invivo Ansin-2对UVB诱导的皮肤色素沉着的影响
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 实验耗材与试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 Ansin-2预防UVB诱导的色素沉着能力检测
4.3.2 Ansin-2修复UVB诱导的色素沉着能力检测
4.3.3 Ansin-2的透皮吸收利用度评价
4.3.4 数据统计分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 Ansin-2对UVB诱导的皮肤色素沉着的保护作用
4.4.2 Ansin-2对UVB诱导的皮肤色素沉着的修复作用
4.4.3 Ansin-2的透皮吸收利用度评价
4.5 本章小结
5 Ansin-2的作用机制探究与毒理评价
5.1 引言
5.2 材料与仪器
5.2.1 实验材料与试剂
5.2.2 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 细胞的培养和传代
5.3.2 Westernblotting
5.3.3 Ansin-2与酪氨酸酶分子对接模拟
5.3.4 肥大细胞脱颗粒实验
5.3.5 数据统计分析
5.4 实验结果与讨论
5.4.1 抑制黑色素生成的信号通路研究
5.4.2 Ansin-2与酪氨酸酶分子相互作用的结构模拟分析
5.4.3 Ansin-2的免疫原性检测
5.5 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
本文编号：3935056
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3935056.html