新型微管靶向抑制剂LL-01和LL-02抗肿瘤活性与机制研究

发布时间：2017-06-29 22:18

  本文关键词：新型微管靶向抑制剂LL-01和LL-02抗肿瘤活性与机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景在全球范围内,由于其高发性和高致死性,癌症已成为一个巨大的社会负担。除手术、放疗外,化疗仍然是肿瘤治疗的主要手段。微管是细胞骨架的主要组成成分,在真核细胞中必不可少。微管参与多种细胞过程,如维持细胞形态、参与细胞内物质转运、参与细胞内信号转导、调节细胞有丝分裂等。由于其在细胞,尤其是细胞分裂中的重要作用,微管常作为抗肿瘤药物研究的靶点。根据与微管作用位点的不同,微管靶向抑制剂主要分为作用于紫杉醇位点、长春碱位点和秋水仙碱位点的微管靶向抑制剂。尽管紫杉醇类和长春碱类微管靶向抑制剂广泛用于临床肿瘤治疗,但是这类药物经常伴随过敏性反应、骨髓抑制、周围神经病变等副作用以及肿瘤的多药耐药现象。因此,新型小分子秋水仙碱类微管靶向抑制剂成为人们研究的热点。LL-01和ILL-02是通过计算机辅助药物设计合成的靶向微管秋水仙碱位点的化合物。本课题主要研究LL-01和LL-02抗肿瘤活性及作用机制。第一部分LL-01抗非小细胞肺癌活性与机制研究实验方法：采用MTT法、克隆形成实验、台盼蓝染色实验及裸鼠移植瘤实验来评价LL-01对非小细胞肺癌的增殖抑制作用。体外微管聚合实验及免疫荧光染色实验检测LL-01对微管聚合的影响。PI单染法检测LL-01对A549细胞周期分布的影响。细胞形态学观察和Annexin V-FITC/PI双染法检测LL-01对非小细胞肺癌细胞的凋亡诱导作用。Western blotting法检测LL-01对A549细胞中cyclin B1、p-cdc2、cleaved caspase-3和cleaved PARP表达水平的影响。小管形成实验检测LL-01对血管形成的影响。实验结果：LL-01可显著抑制非小细胞肺癌体内外增殖,且无明显毒性。LL-01体外能够抑制微管蛋白聚合,并可破坏A549细胞微管结构。LL-01可诱导A549细胞G2/M期阻滞,并能调节G2/M期相关蛋白cyclin B1和p-cdc2的表达。LL-01可诱导非小细胞肺癌细胞凋亡,并能提高cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达水平。此外,LL-01能有效抑制小管形成,并呈现浓度依赖性。实验结论：新型微管靶向抑制剂LL-01能有效抑制非小细胞肺癌体内外增殖,其作用机制与靶向微管破坏微管动力学从而诱导细胞G2/M期阻滞及凋亡有关。此外,LL-01还具有良好的抗血管生成活性。因此,LL-01有潜力成为抗非小细胞肺癌的候选药物。第二部分LL-02抗白血病活性与机制研究实验方法：MTT法评价LL-02对一系列肿瘤细胞的增殖抑制作用,并选取白血病细胞K562进行后续研究。体外微管聚合实验及体内微管聚合实验检测LL-02对微管聚合的影响。PI单染法检测LL-02对K562细胞周期分布的影响。细胞形态学观察和Annexin V-FITC/PI双染法检测LL-02对K562细胞的凋亡诱导作用。小管形成实验检测LL-02对血管形成的影响。实验结果：LL-02对一系列肿瘤细胞均有抑制作用,半数抑制率在19-102 nmol/L之间,并以时间剂量依赖性方式抑制白血病细胞K562和CCRF-CEM的增殖。LL-02在体外和K562细胞内均可抑制微管蛋白聚合。LL-02可诱导K562细胞G2/M期阻滞和凋亡。此外,LL-02能有效抑制小管形成,并呈现浓度依赖性。实验结论：新型微管靶向抑制剂LL-02抗瘤谱广,并能有效抑制白血病细胞增殖,其机制可能是靶向微管破坏微管动力学从而诱导细胞G2/M期阻滞及凋亡。此外,LL-02还具有良好的抗血管生成活性。因此,LL-02有潜力成为抗白血病的候选药物。
【关键词】：微管靶向抑制剂 抗增殖活性 G2/M期阻滞 凋亡 抗血管生成
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-15
• 符号说明15-17
• 前言17-26
• 1 微管17-21
• 1.1 微管的结构17-19
• 1.2 微管的动力学特性19-20
• 1.3 微管在细胞内的生理功能20-21
• 2 微管靶向抑制剂21-24
• 2.1 微管靶向抑制剂的抗肿瘤机制22
• 2.2 微管靶向抑制剂的分类22-24
• 3 本课题研究内容24-26
• 第一部分 LL-01抗非小细胞肺癌活性与机制研究26-48
• 1 实验材料26-28
• 1.1 化合物26
• 1.2 细胞株26
• 1.3 实验动物及人非小细胞肺癌组织26
• 1.4 试剂26-28
• 1.5 仪器设备28
• 2 实验方法28-35
• 2.1 肿瘤细胞生长抑制实验28-30
• 2.2 细胞形态学观察30
• 2.3 体外微管聚合实验30-31
• 2.4 免疫荧光染色实验31
• 2.5 细胞周期检测31-32
• 2.6 Annexin V-FITC/PI染实验32
• 2.7 Western blotting检测蛋白表达32-34
• 2.8 小管形成实验34-35
• 2.9 体内抗肿瘤活性研究(裸鼠移植瘤实验)35
• 3 实验结果35-45
• 3.1 LL-01抑制非小细胞肺癌细胞增殖35-37
• 3.2 LL-01抑制非小细胞肺癌移植瘤的生长37-38
• 3.3 LL-01抑制微管蛋白聚合38-39
• 3.4 LL-01诱导A549细胞G2/M期阻滞并调节相关蛋白的表达39-41
• 3.5 LL-01通过激活caspase-3诱导非小细胞肺癌细胞凋亡41-44
• 3.6 LL-01抑制HUVEC细胞小管生成44-45
• 4 讨论与结论45-48
• 第二部分 LL-02抗白血病活性与机制研究48-57
• 1 实验材料48
• 1.1 化合物48
• 1.2 细胞株48
• 1.3 试剂48
• 1.4 仪器设备48
• 2 实验方法48-49
• 2.1 MTT法48
• 2.2 细胞形态学观察48-49
• 2.3 体外微管聚合实验49
• 2.4 体内微管聚合实验49
• 2.5 细胞周期检测49
• 2.6 Annexin V-FITC/PI双染实验49
• 2.7 小管形成实验49
• 3 实验结果49-56
• 3.1 LL-02抑制肿瘤细胞增殖49-51
• 3.2 LL-02抑制微管蛋白聚合51-52
• 3.3 LL-02诱导K562细胞G2/M期阻滞52-53
• 3.4 LL-02诱导K562细胞凋亡53-55
• 3.5 LL-02抑制HUVEC细胞小管生成55-56
• 4 讨论与结论56-57
• 参考文献57-66
• 致谢66-67
• 攻读硕士学位期间发表和待发表的学术论文67-68
• 学位论文评阅及答辩情况表68

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1 王静静;新型微管靶向抑制剂LL-01和LL-02抗肿瘤活性与机制研究[D];山东大学;2016年

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本文编号：499575