丝氨酸蛋白酶Omi切割E2F1调控神经突起生长

发布时间：2017-07-05 12:17

  本文关键词：丝氨酸蛋白酶Omi切割E2F1调控神经突起生长

  更多相关文章： 神经元分化 Omi E2F1 运动神经障碍2型鼠mnd2鼠

【摘要】：目的:Omi是一种可以行使多种细胞功能的蛋白酶。Omi蛋白酶活性缺失突变会诱发帕金森病的发生。本课题目的旨在发现Omi的底物蛋白,探索Omi对神经元分化的调控作用。方法:应用GST pulldown实验和体外蛋白切割实验来明确Omi的底物蛋白。通过蛋白免疫印迹实验来检测蛋白的表达水平。通过转染质粒、si RNA、sh RNA,对目的蛋白的功能进行研究。应用实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction)技术来检测m RNA水平。在小鼠神经母细胞瘤细胞系(N2a细胞)中使用20μM视黄酸(RA)诱导分化;对分化的的N2a细胞,给予Omi蛋白酶活性抑制剂UCF101或者转染sh RNA沉默Omi的表达,检测细胞突起长度,验证Omi对神经细胞分化影响;使用Image J软件计算细胞突起长度。结果:我们在Omi蛋白酶活性缺失鼠mnd2鼠和Omi基因沉默细胞系中发现E2F1的表达水平明显上调;但在mnd2鼠中E2F1的m RNA表达水平没有变化。不同细胞系中转染野生型Omi质粒后发现E2F1的表达水平有所下调,但转染丝氨酸蛋白酶活性缺陷突变体S276C Omi质粒后E2F1的表达水平没有变化。我们在鼠脑组织中发现E2F1与Omi相结合。在视黄酸诱导分化的N2a细胞中,沉默Omi的表达或者给予Omi蛋白酶抑制剂UCF101可以抑制神经突起生长,并且都伴随着E2F1表达量的增加。结论:E2F1是Omi的底物蛋白。Omi通过切割降解E2F1来调控神经元的分化。
【关键词】：神经元分化 Omi E2F1 运动神经障碍2型鼠mnd2鼠
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-10
• 材料与方法10-24
• 1 实验材料10-13
• 2 实验方法13-23
• 3.统计学方法23-24
• 结果24-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-45
• 综述：转录因子E2F1 与神经退行性疾病45-53
• 参考文献48-53
• 英文缩写词表53-54
• 攻读学位期间发表论文54-55
• 致谢55-56

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本文编号：521938