葡萄糖剥夺通过上调ATF4诱导结直肠癌耐药的实验研究

发布时间：2017-07-19 07:06

  本文关键词：葡萄糖剥夺通过上调ATF4诱导结直肠癌耐药的实验研究

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【摘要】：目的:化疗耐药是肿瘤化疗失败的主要原因之一。最近研究表明肿瘤微环境在肿瘤发生发展与肿瘤耐药中起到重要的作用。肿瘤微环境发生改变,如缺氧、葡萄糖剥夺(glucose deprivation,GD),可以促进肿瘤的发生发展与耐药。然而,人们关于GD诱导结直肠癌(colorectal cancer,CRC)耐药的机制知之甚少。因此,我们探讨了GD在CRC细胞耐药中的作用和内在机制。方法:在GD的条件下检测CRC细胞的耐药与调亡。在GD处理CRC的细胞和转录激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)过表达的CRC细胞中,通过sh RNA敲降ATF4,探讨ATF4在GD诱导耐药中的作用。通过q RT-PCR和Western blotting检测MDR1 m RNA和蛋白水平的表达。结果:在本研究中,我们发现GD能够保护CRC细胞抵制抗肿瘤药奥沙利铂(oxaliplatin,LOHP)和5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)诱导的细胞凋亡,并且诱导未折叠蛋白反应中重要的基因ATF4表达。同时,我们发现在GD处理CRC细胞中敲降ATF4可以促进药敏、诱导凋亡。同样,在ATF4过表达的CRC细胞中敲降ATF4也可以促进药敏与诱导凋亡。除此之外,MDR1表达上调在GD处理CRC的细胞中。结论:GD通过上调ATF4促进CRC细胞耐药,ATF4可作为抵抗CRC细胞耐药的作用新靶点。
【关键词】：葡萄糖剥夺 ATF4 LOHP 5-FU 化疗耐药
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 缩写词表7-8
• 第一章 前言8-16
• 1.1 研究背景8-9
• 1.2 综述9-14
• 1.2.1 UPR与肿瘤10-12
• 1.2.2 UPR与肿瘤耐药12-13
• 1.2.3 UPR相关其他的信号通路参与肿瘤耐药13-14
• 1.2.4 结语14
• 1.3 研究意义14-15
• 1.4 研究内容15-16
• 第二章 实验材料与方法16-28
• 2.1 实验材料16-20
• 2.1.1 实验试剂16
• 2.1.2 仪器与耗材16-17
• 2.1.3 细胞株17
• 2.1.4 质粒、引物、抗体17-18
• 2.1.5 主要试剂配制18-20
• 2.2 实验方法20-28
• 2.2.1 细胞培养20
• 2.2.2 质粒扩增20
• 2.2.3 稳转株构建20-21
• 2.2.4 瞬时转染21
• 2.2.5 CCK-8 测药敏21-23
• 2.2.6 Hochest染色测凋亡23
• 2.2.7 qRT-PCR23-25
• 2.2.8 Western blot25
• 2.2.9 流式细胞术测凋亡25-26
• 2.2.10 CCK-8 测增殖26-27
• 2.2.11 统计分析27-28
• 第三章 实验结果与讨论28-39
• 3.1 GD诱导CRC细胞耐药28-30
• 3.1.1 GD诱导CRC细胞耐药28-29
• 3.1.2 GD抵抗抗肿瘤药诱导的CRC细胞凋亡29
• 3.1.3 GD诱导CRC细胞耐药基因的表达29-30
• 3.2 GD激活CRC细胞中Grp78/PERK/ATF4通路30-31
• 3.3 GD通过上调ATF4诱导CRC细胞耐药31-34
• 3.3.1 敲降ATF4能逆转GD诱导的CRC细胞耐药31-32
• 3.3.2 敲降ATF4能逆转GD诱导的CRC细胞抗凋亡32-34
• 3.3.3 在GD处理的CRC细胞中敲降ATF4导致耐药基因的表达下调34
• 3.4 敲降ATF4增加CRC细胞对药物的敏感性和促进药物诱导的凋亡34-36
• 3.4.1 敲降ATF4增加CRC细胞对化疗药物的敏感性34-35
• 3.4.2 敲降ATF4能促进药物诱导的凋亡35-36
• 3.4.3 敲降ATF4降低耐药基因的表达36
• 3.5 ATF4促进CRC细胞增殖36-39
• 主要结论与展望39-41
• 主要结论39
• 展望39-41
• 致谢41-42
• 参考文献42-46
• 附录A：攻读硕士学位期间发表的论文46-48
• 附录B：本研究获得的资金资助48

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