羟基酪醇前体药物的制备及体外活性评价

发布时间：2017-04-11 17:18

  本文关键词：羟基酪醇前体药物的制备及体外活性评价，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的设计、合成羟基酪醇前体药物,研究其对肿瘤细胞的抑制作用及诱导肿瘤细胞凋亡,考察其在体外肿瘤细胞作用下能否释放出原药,为其今后的体内研究提供参考依据。方法1以羟基酪醇为原料,依据酯化反应,分别与对甲苯磺酰氯、甲基磺酰氯和对硝基苯磺酰氯反应合成羟基酪醇前体药物。2将羟基酪醇前体药物作用于神经胶质瘤C6细胞、肺癌A549细胞和结肠癌HT-29细胞,用CCK-8法测定其对肿瘤细胞的抑制作用。3将筛选出羟基酪醇前体药物B1、B2以不同浓度作用于神经胶质瘤C6细胞24h后,在倒置显微镜下观察细胞形态变化。4在倒置荧光显微镜下通过Hoechst 33342/PI双染观察B1、B2作用于C6细胞24h后的形态变化。5利用流式细胞仪分析B1、B2处理C6细胞24h后细胞周期的变化。6收集B1、B2作用C6细胞后的含药培养液及细胞,用乙酸乙酯萃取,萃取液经HPLC分析。结果1按照设计的合成方法,完成目标化合物制备,经光谱鉴定。2 CCK-8比色法结果显示:在8种羟基酪醇前体药物中,B1、B2对神经胶质瘤C6细胞、肺癌A549细胞和结肠癌HT-29细胞三种肿瘤细胞的增殖抑制作用均最强,且强于原药羟基酪醇。在三种肿瘤细胞中,C6细胞对前药B1、B2最敏感,且前药B1对其呈剂量依赖性抑制,而前药B2在浓度为150umol/L时,抑制率就达到80%以上,增加浓度抑制率无明显变化,在浓度为1200umol/L时,抑制率有所降低。3将不同浓度的B1、B2作用于C6细胞24小时后,在倒置显微镜下观察可见:随着给药剂量的增加,细胞变圆,死细胞越来越多,贴壁生长的细胞变稀疏,并出现细胞碎片。4在倒置荧光显微镜下观察可见:随着给药浓度增加出现了呈亮蓝色荧光的早期凋亡细胞及呈红色荧光的晚期凋亡细胞和坏死细胞。5流式细胞仪检测发现:羟基酪醇前体药物B1、B2可使神经胶质瘤细胞C6阻滞在G1期而诱导细胞凋亡。6经HPLC检测发现羟基酪醇前体药物B1、B2作用于C6细胞24h后能够释放出原药HT,但是量很少,HT所占前体药物B1、B2的比例也很小。结论本论文以羟基酪醇为原药,通过酯化反应设计并合成了3个系列8种羟基酪醇前体药物;通过体外肿瘤细胞增殖抑制试验,筛选出两种具有强抗肿瘤活性的羟基酪醇前体药物B1、B2,其通过阻滞细胞周期G1期来实现诱导细胞凋亡作用;通过HPLC分析发现B1、B2能够释放出原药HT,为其进一步体内研究提供参考依据。
【关键词】：羟基酪醇前体药物 抗肿瘤活性 细胞凋亡 释放原药
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-12
• 第1章 目标化合物的设计和合成12-30
• 1.1 材料与方法12-15
• 1.1.1 原料和试剂12
• 1.1.2 主要仪器和设备12-13
• 1.1.3 羟基酪醇前体药物的制备13-15
• 1.2 结果15-26
• 1.2.1 用对甲苯磺酰氯制备羟基酪醇前体药物15-19
• 1.2.2 用甲基磺酰氯制备羟基酪醇前体药物19-22
• 1.2.3 用对硝基苯磺酰氯制备羟基酪醇前体药物22-26
• 1.3 讨论26-27
• 1.4 小结27-28
• 参考文献28-30
• 第2章 体外活性评价30-54
• 2.1 材料与方法30-36
• 2.1.1 原料与试剂30-31
• 2.1.2 主要溶液的配制31-32
• 2.1.3 实验方法32-35
• 2.1.4 统计学分析35-36
• 2.2 结果36-48
• 2.2.1 羟基酪醇及其前体药物对肿瘤细胞增殖抑制作用36-40
• 2.2.2 倒置显微镜观察细胞形态变化40-41
• 2.2.3 Hoechst33342-PI双染观察细胞凋亡情况41-42
• 2.2.4 不同浓度羟基酪醇前体药物对细胞周期的影响42-45
• 2.2.5 前药在体外转化为原药的测定45-48
• 2.3 讨论48-51
• 2.3.1 羟基酪醇前体药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用48-49
• 2.3.2 羟基酪醇前体药物对细胞形态的影响49-50
• 2.3.3 羟基酪醇前体药物对细胞凋亡的影响50-51
• 2.3.4 羟基酪醇前体药物与酯酶51
• 2.4 小结51-52
• 参考文献52-54
• 第3章 综述 羟基酪醇及前体药物研究进展54-70
• 3.1 羟基酪醇概述54-59
• 3.1.1 羟基酪醇的研究进展54-56
• 3.1.2 羟基酪醇的化学结构及理化性质56-57
• 3.1.3 羟基酪醇的药理作用57-59
• 3.2 前体药物59-62
• 3.2.1 前体药物结构60
• 3.2.2 制备原理60-61
• 3.2.3 前体药物的应用61-62
• 3.2.4 羟基酪醇前体药物研究进展62
• 3.3 抗肿瘤前体药物与酯酶62-63
• 参考文献63-70
• 结论70-71
• 致谢71-72
• 导师简介72-73
• 作者简介73-74
• 学位论文数据集74

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本文编号：299583