NCOA5在结直肠癌中的表达、功能及机制研究

发布时间：2017-06-26 22:01

  本文关键词：NCOA5在结直肠癌中的表达、功能及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测结直肠癌标本中NCOA5的表达,分析NCOA5表达与结直肠癌患者临床病理特征之间的关系;在结直肠癌细胞系SW480和SW620中沉默及过表达NCOA5,研究NCOA5对结直肠癌细胞增殖、侵袭迁移、细胞周期的影响及其相关机制。方法:收集临床结直肠癌组织标本,免疫组化及Western blot检测NCOA5的表达。筛选结肠癌细胞株,得到NCOA5高表达细胞株SW620及NCOA5低表达细胞株SW480;构建三条特异性的干扰NCOA5表达序列及一条随机序列的慢病毒表达载体感染SW620细胞株;Western blot、CCK-8法、流式细胞、细胞划痕及Transwell实验分别检测干扰后NCOA5的表达、细胞生长增殖、细胞周期分布、细胞迁移的影响;Western blot检测PI3K/AKT/MMP9信号通路和PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信号通路相关蛋白的表达。同时设计构建过表达NCOA5慢病毒载体感染SW480细胞株,Western blot检测PI3K/AKT/MMP9信号通路和PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信号通路相关蛋白的表达。Western blot检测PI3K抑制剂LY294002作用于过表达NCOA5的SW480细胞株后下游相关信号蛋白的表达。结果:分析结直肠癌标本的免疫组化及临床资料结果显示,NCOA5在癌组织中高表达(78.6%),NCOA5阳性表达率升高与肿瘤大小(P0.001)、区域淋巴结转移(P=0.005)、肿瘤TMN分期(P=0.018)有关;Western Blot显示结直肠癌组织中NCOA5表达较癌旁组织显著增高,表达率约为75%。体外成功构建慢病毒干扰载体;感染结直肠癌细胞株SW620后,Western Blot结果显示NCOA5表达下调,CCK-8法结果表明沉默NCOA5后细胞增殖能力下降(P0.05),流式细胞仪结果显示干扰细胞G0/G1期比例增加,细胞划痕及Transwell实验表明沉默NCOA5后细胞迁移能力下降,P-AKT、MMP9和Cyclin D1表达下降,AKT表达基本不变,P27表达升高。慢病毒过表达载体感染结直肠癌细胞株SW480后,P-AKT、MMP9和Cyclin D1表达升高,AKT表达基本不变,P27表达下降。LY294002作用于过表达NCOA5的SW480细胞株后P-AKT、MMP9和Cyclin D1表达下降,AKT表达基本不变,P27表达升高,与干扰结果一致。结论:1.发现NCOA5在结直肠癌组织中存在高表达,其表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期相关,具有作为肿瘤标志物的潜在价值;2.下调NCOA5表达后,结直肠癌细胞株SW620增殖能力显著下降的,细胞周期被阻滞在G0/G1期;3.下调NCOA5表达后,结直肠癌细胞株SW620的侵袭、转移能力显著下降;4.发现PI3K/AKT/Cyclin D1、P27信号通路在NCOA5诱导的结直肠癌中细胞周期阻滞发挥着重要的作用;5.发现PI3K/AKT/MMP9信号通路在NCOA5诱导的结直肠癌侵袭转移中发挥着重要的作用。
【关键词】：结直肠癌 NCOA5 免疫组化 AKT
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 NCOA5 在结直肠癌组织中的表达情况以及其与患者病理特征之间的关系的研究11-19
• 一、材料与方法11-14
• 二、结果14-18
• 三、讨论18-19
• 第二部分 NCOA5 对结直肠癌细胞的增殖、侵袭、转移等方面的影响19-32
• 一、材料与方法19-25
• 二、结果25-30
• 三、讨论30-32
• 第三部分 NCOA5 参与信号通路初步研究32-39
• 一、材料与方法32-33
• 二、结果33-37
• 三、讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-42
• 综述42-49
• 参考文献47-49
• 攻读学位期间发表的论文49-50
• 致谢50-51

【参考文献】

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1 孙文靖;马琳琳;韩菲菲;任聪;傅松滨;傅松滨;;小鼠H_2B-GFP真核表达载体的构建与鉴定[J];国际遗传学杂志;2006年01期

  本文关键词：NCOA5在结直肠癌中的表达、功能及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：487679