槲皮素对裸鼠肝癌切除术后肿瘤复发转移的影响及机制

发布时间：2017-06-30 09:13

  本文关键词：槲皮素对裸鼠肝癌切除术后肿瘤复发转移的影响及机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]通过体内实验研究槲皮素能否抑制裸鼠肝癌切除术后的肿瘤复发转移,并研究其抑制复发转移可能的分子机制。[方法](一) HCCLM6细胞培养：HCCLM6细胞用含15%新生胎牛血清的高糖DMEM完全培养于37℃、5%CO2、混合气体的孵箱(95%饱和湿度)内培养。每2天换液一次。细胞单层贴壁生长,待长满瓶底时,用胰蛋白消化液消化成单个细胞,传代培养。(二)模拟人肝癌切除术后肿瘤高转移复发裸鼠模型的建立：取对数期生长的HCCLM6细胞接种于裸鼠右侧腋下,约10d成瘤；30d切除腋下肿瘤制成1mm3大小,开腹原位接种于裸鼠左肝；接种后10d开腹在裸鼠左肝根部结扎后切除左肝。(三)造模后实验动物分为对照组(灌胃生理盐水)、槲皮素组(灌胃槲皮素75mg/kg · d)两组,每周连续给药5天后停药2天,给药30d。(四)给药30d后脱颈处死裸鼠,观察各组裸鼠复发灶体积、肝内转移数目,肝脏复发肿瘤切片HE染色观察肿瘤细胞形态。(五)取复发肿瘤组织做western-blot检测P65、MMP-2、E-Cadherin蛋白的表达.[结果]给药30天后处死所有裸鼠,槲皮素组和生理盐水组裸鼠肝脏肿瘤复发率100%。对照组和槲皮素组复发肿瘤的体积分别是49.75mm3和25.49mm3,差异有统计学意义(P0.05),表明槲皮素能够抑制裸鼠肝癌切除术后复发肿瘤的生长。对裸鼠肝脏进行逐层切片,计数和测量肝内肿瘤转移灶,对照组5只裸鼠肝内转移率100%,槲皮素组5只裸鼠有4只肝内有转移灶,对照组肝内肿瘤转移数为2.20±0.84,而槲皮素组肝内肿瘤转移数为1.00±0.71,差异具有统计学意义(P0.05),表明槲皮素能够减少裸鼠肝癌切除术后肿瘤的肝内转移数目。采用western blot检测各组裸鼠肝脏复发肿瘤P65、MMP-2、E-Cadherin蛋白的表达情况,结果显示：槲皮素组和对照组裸鼠肝脏复发肿瘤灶表达的P65蛋白灰度值分别是156.26±8.60和170.07±6.61,差异有统计学意义(P0.05),槲皮素组P65蛋白表达较对照组明显降低,表明槲皮素能够抑制裸鼠肝癌组织P65蛋白的表达。对照组和槲皮素组裸鼠肝脏复发肿瘤表达的MMP-2蛋白灰度值分别是169.21±5.32和158.17±4.80,差异有统计学意义(P0.05),两组裸鼠肝脏肿瘤组织MMP-2蛋白表达有差异,槲皮素组表达较对照组低。对照组和槲皮素组裸鼠肝脏复发肿瘤表达的E-Cadherin蛋白灰度值分别是136.24±3.03和144.70±5.02,差异有统计学意义(P0.05),两组裸鼠肝脏复发肿瘤组织E-Cadherin的表达有差异,槲皮素组表达较对照组高。结果表明：槲皮素能够上调E-Cadherin的表达。[结论]槲皮素能够抑制裸鼠肝癌切除术后肝脏复发肿瘤的生长和减少肝内肿瘤播散数目；槲皮素能够抑制P65蛋白的表达,上调E-Cadherin的表达,下调MMP-2蛋白的表达。
【关键词】：槲皮素 肝癌切除术 复发 转移 P65
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-25
• 结果25-32
• 讨论32-37
• 结论37-38
• 参考文献38-41
• 综述41-49
• 参考文献46-49
• 攻读学位期间获得的学术成果49-50
• 致谢50

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