溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A对肺癌细胞抑制作用研究

发布时间：2017-06-30 12:10

  本文关键词：溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A对肺癌细胞抑制作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近些年来，肺癌的发病率在全球范围内呈持续上升的趋势，甚至已经成为第一高发恶性肿瘤。面对传统肺癌的治疗方法，手术、放疗和化疗，已经不能有效的控制全球肺癌蔓延的趋势。随着分子生物学、细胞生物学和病毒学的发展，基因治疗已成为癌症治疗的另一有利武器，其中腺病毒载体癌症治疗表现出了巨大的优势，，且腺病毒载体联合化疗在癌症临床上受到了广泛关注。 目前，全世界仅有两种肿瘤基因治疗药物，一种为上海三维生物技术有限公司生产的重组人5型腺病毒（安柯瑞），其删除抗凋亡基因E1B和促进病毒粒子释放的基因E3，而发挥抗肿瘤作用；另一种为深圳市赛百诺基因技术有限公司生产的重组人p53腺病毒（今又生），是以5型腺病毒为载体，携带p53抑癌基因发挥抗肿瘤作用。 腺病毒载体对基因转导是一种有效的工具，因此成为最常用的腺病毒载体。但安全性和有效性是评价溶瘤腺病毒的重要指标。第一代腺病毒载体由于病毒衣壳蛋白影响而会诱发机体明显的免疫反应，以及删除复制必需基因E1A，而影响病毒复制，这样便不利于腺病毒的持续作用。本课题组基于RAPAD.I系统，由巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）启动子驱动特异性抑癌基因Apoptin，人端粒末端转移酶（hTERT）启动子驱动腺病毒复制必需基因E1A，从而构建了同时具有肿瘤特异性复制和肿瘤特异性杀伤能力的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A（ATV），并构建了对照病毒Ad-ΔE1B55K-ΔE3（rAd5）、Ad-p53和Ad-CMV-EGFP（Ad-EGFP）。 MTS法用于检测重组腺病毒单独使用或联合顺铂对A549细胞生长抑制作用，结果表明ATV单独或联合顺铂对A549细胞杀伤抑制作用均具有一定的剂效关系和时效关系，ATV抑制率明显高于rAd5和Ad-p53，ATV联合组显著强于rAd5联合组和Ad-p53联合组，且顺铂可增强ATV对A549细胞的抑制作用；AO/EB染色、DAPI染色和Annexin V检测用于探讨重组腺病毒对A549细胞的抑制方式，结果表明ATV和Ad-p53主要是通过诱导A549细胞凋亡而达到抑制目的，而rAd5则主要是通过细胞溶胀作用致使细胞死亡；Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验用于探讨A549细胞因ATV或ATV联合顺铂的抑制作用而对其迁移和侵袭能力的影响，结果表明ATV感染的A549细胞的迁移与侵袭能力受到显著影响，并具有一定的剂效和时效关系，ATV对A549细胞的影响要大于其他对照病毒，且ATV联合组要优于ATV单独组。 建立A549皮下移植瘤裸鼠模型，通过测定肿瘤生长趋势和平均生存期指标，旨在探讨溶瘤腺病毒ATV及其联合顺铂对肺癌的体内抑制效果，结果表明，相比ATV单独治疗，ATV联合低剂量顺铂可以有效抑制移植瘤的生长及延长裸鼠平均生存期。各项实验结果揭示溶瘤腺病毒ATV及ATV联合顺铂在治疗肺癌方面具有潜在研究价值，及为临床治疗提供一定的理论基础。
【关键词】：基因治疗 溶瘤腺病毒 人端粒末端转移酶 凋亡素基因 化疗
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略词10-11
• 绪论11-13
• 第一篇 文献综述13-29
• 1 溶瘤腺病毒及化疗的研究进展13-20
• 1.1 腺病毒载体概述13-14
• 1.2 溶瘤腺病毒当前情况14-15
• 1.3 溶瘤腺病毒在临床中的限制性15-16
• 1.4 提高癌症细胞感染有效性的方法16-18
• 1.5 提高溶瘤腺病毒复制特异性的策略18-20
• 2 溶瘤腺病毒与化疗联合在抗肿瘤领域的应用20-29
• 2.1 化疗概述20-21
• 2.2 溶瘤腺病毒与标准化疗药联合21-24
• 2.3 溶瘤腺病毒与靶向化疗药联合24-27
• 2.4 展望27-29
• 第二篇 研究内容29-79
• 第一章 重组腺病毒对肺癌细胞 A549 的体外抑制研究29-53
• 1.1 材料与方法29-35
• 1.2 结果35-49
• 1.3 讨论49-52
• 1.4 小结52-53
• 第二章 重组腺病毒对肺癌细胞 A549 抑制而对迁移和侵袭能力的影响53-69
• 2.1 材料与方法53-56
• 2.2 结果56-64
• 2.3 讨论64-67
• 2.4 小结67-69
• 第三章 重组腺病毒对肺癌细胞 A549 的体内抑制研究69-79
• 3.1 材料与方法69-71
• 3.2 结果71-76
• 3.3 讨论76-78
• 3.4 小结78-79
• 结论79-80
• 参考文献80-93
• 导师与作者介绍93-94
• 攻读学位期间所取得的科研成果94-95
• 致谢95

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 高卫栋;王红兵;吴泽志;杨本艳姿;林雨;;肿瘤细胞迁移特性及细胞迁移能力表征[J];细胞生物学杂志;2008年04期

2 王宏芳;刘扬;李金华;吴嘉慧;李艳博;王志成;刘威武;龚守良;;双重靶向条件复制型腺病毒的包装及抗肿瘤作用[J];西安交通大学学报(医学版);2013年03期

3 陈智飞;李一权;胡宁宁;兰添;周晔;李霄;孙丽丽;金宁一;;携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2015年01期

  本文关键词：溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A对肺癌细胞抑制作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：501860