AMPK对小鼠乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育的影响

发布时间：2017-07-05 22:16

  本文关键词：AMPK对小鼠乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育的影响

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【摘要】：目的:5’单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)是真核生物中被公认的能量调节感受器。本研究旨在构建AMPK dominant negative转基因小鼠,观察AMPK活性抑制后对乳腺上皮细胞增殖及乳腺发育的影响,观察AMPK激活剂二甲双胍对乳腺发育的作用,探究是否有恶性化肿瘤的形成。方法:1.利用外源性α-flag修饰AMPK突变片段构建AMPK dominant negative转基因鼠(以下简称DN),采用PCR及免疫组化的方法检测靶基因和蛋白的表达以检测转基因鼠的构建成功。2.采用Whole Mount的方法,观察比较4~30不同周龄、妊娠期5 d/10 d/17d及哺乳期2 d DN和WT雌鼠乳腺全组织形态的变化情况;并通过HE以及PCNA染色进一步观察AMPK活性降低对小鼠乳腺上皮细胞结构及增殖的影响。3.用5 mg/ml浓度二甲双胍腹腔注射4周龄、妊娠期5天和10天WT小鼠7天,Whole mount观察青春期导管的形态学变化。结果:1.RT-PCR鉴定AMPK DN基因型,目的条带为500bp。利用Q-PCR检测α-flag片段在小鼠乳腺中基因RNA水平的表达,显示WT中并无表达。另外,免疫组化进一步证实α-flag蛋白在DN小鼠上皮细胞中表达,且p-AMPK表达下降,提示转基因鼠的构建成功。2.青春期,AMPK活性降低对小鼠乳腺导管的延伸和扩展进程无显著变化,然而,5w DN小鼠中导管终端TEB逐渐增多,较WT小鼠差异有统计意义;5w、6w时,TEB面积均较WT组大,p0.05,其差异具有统计学意义;同时,HE及PCNA显示促进成熟导管上皮的细胞增殖及增厚。妊娠期,DN和WT组乳腺发育无明显区别,哺乳期DN小鼠腺泡内腔大于WT小鼠,p0.05,其差异具有统计学意义。3.形态学上,二甲双胍能抑制妊娠期初期乳腺导管发育。结论:AMPK dominant negative(DN)转基因鼠成功构建;小鼠乳腺上皮AMPK活性降低促进青春期小鼠导管上皮细胞的增殖,促进TEBs的发育,对妊娠期乳腺发育无明显变化,二甲双胍抑制妊娠期初期导管发育;AMPK活性变化能影响小鼠乳腺的阶段发育。
【关键词】：AMPK 乳腺上皮细胞 增殖 乳腺发育
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词对照表9-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 实验材料与方法15-27
• 2.1 实验材料15-18
• 2.1.1 小鼠15
• 2.1.2 主要试剂15-17
• 2.1.3 主要抗体17
• 2.1.4 引物17
• 2.1.5 主要仪器17
• 2.1.6 主要溶液的配制17-18
• 2.2 实验方法18-27
• 2.2.1 小鼠编号18-19
• 2.2.2 小鼠组织DNA提取及基因型检测19-20
• 2.2.3 RNA提取，RT-PCR及Q-PCR20-23
• 2.2.4 乳腺组织的全组织染色（Whole Mount）23
• 2.2.5 组织切片的HE染色23-24
• 2.2.6 组织切片的免疫组化24-26
• 2.2.7 实验测量指标26
• 2.2.8 实验数据统计分析26-27
• 第3章 AMPK乳腺特异性突变小鼠的构建及鉴定27-29
• 3.1 实验目的27
• 3.2 实验结果27-29
• 3.2.1 AMPK DN在小鼠组织DNA中的表达及α-flag mRNA在小鼠乳腺中的表达27-28
• 3.2.2 α-flag及p-AMPK蛋白在小鼠乳腺中的定位及表达28-29
• 第4章 AMPK DN对小鼠乳腺生长发育的影响29-34
• 4.1 实验目的29
• 4.2 实验结果29-34
• 4.2.1 AMPK DN对小鼠乳腺生长发育的影响29-31
• 4.2.2 AMPK DN对青春期乳腺上皮细胞组织排列的影响31-33
• 4.2.3 AMPK DN对青春期乳腺上皮细胞增殖的影响33-34
• 第5章 AMPK DN对小鼠妊娠期乳腺发育的影响34-38
• 5.1 研究目的34
• 5.2 实验结果34-38
• 5.2.1 AMPK DN对小鼠妊娠期腺泡形成的影响34-36
• 5.2.2 AMPK DN对腺泡上皮细胞增殖的影响36
• 5.2.3 AMPK DN小鼠反复妊娠对乳腺成瘤的影响36-38
• 第6章 Metformin对WT小鼠青春期及妊娠期乳腺发育的形态学研究38-40
• 6.1 研究目的38
• 6.2 实验结果38-40
• 6.2.1 Metformin对WT小鼠青春期乳腺生长发育的影响38
• 6.2.2 Metformin对WT小鼠妊娠期乳腺发育的影响38-40
• 第7章 讨论40-43
• 7.1 AMPK DN转基因鼠的构建40
• 7.2 AMPK调节乳腺发育40-42
• 7.3 二甲双胍、乳腺发育及肿瘤形成42-43
• 第8章 结论43-44
• 附录44-46
• 致谢46-47
• 参考文献47-50
• 攻读学位期间的科研成果50-51
• 综述51-67
• References60-65
• 附图65-67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 Albert J Czaja;;Hepatic inflammation and progressive liver fibrosis in chronic liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2014年10期

2 汤丽霞;杨光;谭家驹;;Smad7抑制肝星状细胞胶原蛋白表达[J];南方医科大学学报;2009年10期

3 谈智,王庭槐;雌激素作用分子机制研究进展[J];中国病理生理杂志;2003年10期

4 康白,韩慧蓉,李广宙,冷萍,高尔;二甲双胍对小鼠血清雌二醇、孕酮含量的影响[J];中国药理学通报;2003年02期

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本文编号：523832