雌激素受体β亚型在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用

发布时间：2017-07-06 18:01

  本文关键词：雌激素受体β亚型在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用

  更多相关文章： ERβ TAM IFN-γ 耐药基因 Akt ERK

【摘要】：目的:探讨在乳腺癌中,雌激素受体α亚型(Estrogen Receptorα,ERα)和β亚型(Estrogen Receptorβ,ERβ)的表达,以及与内分泌治疗耐药的关系和机制。方法:1、以人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231作为研究对象,采用半定量RT-PCR法和Western Blot法检测这两种细胞株ERα和ERβ的表达;在培养24h、48h、72h、96h后,采用MTT法检测各自的增殖情况。2、以人乳腺癌细胞株MCF-7和ERα/ERβ不同表达的人乳腺癌细胞株MCF-7[M/siα(ERαlow/ERβhigh)、M/siβ(ERαhigh/ERβlow)、M/HK(阴性对照)]作为研究对象,单独或联合应用不同终浓度的TAM(0.1、0.5、1、5、10μmol/L)和人重组IFN-γ(rh IFN-γ)(0.5,100 ng/m L)处理细胞,MTT法分析药物对细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法和Western Blot法检测rh IFN-γ(0.5 ng/m L)对人乳腺癌MCF-7细胞中ERβ表达的影响。3、以MCF-7、M/siα、M/siβ、M/HK作为研究对象,半定量RT-PCR法检测其耐药基因MDR1、TOPOII、LRP和GST-π的m RNA表达水平;Western Blot法检测其耐药相关信号通路MAPK、PI3K/Akt中p-ERK、p-Akt的蛋白表达水平。结果:1、半定量RT-PCR法检测结果显示,MCF-7细胞中ERα的m RNA表达水平显著高于MDA-MB-231[(0.191±0.005)vs(0.153±0.003),P0.05],ERβ的m RNA表达水平低于MDA-MB-231[(0.462±0.001)vs(0.587±0.004),P0.05];Western blot检测结果显示,MCF-7细胞中ERα的蛋白水平明显高于MDA-MB-231[(0.796±0.002)vs(0.041±0.008),P0.05],ERβ的蛋白水平略低于MDA-MB-231[(0.57±0.011)vs(0.98±0.009),P0.05];MTT法检测结果显示,经过24h、48h、72h培养,MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的增殖水平无显著性差异[(1.121±0.002)vs(1.201±0.062),(1.232±0.012)vs(1.287±0.054),(1.376±0.028)vs(1.401±0.033),P0.05],经过96h培养,MCF-7细胞的增殖率明显高于MDA-MB-231[(2.215±0.07)vs(1.469±0.011),P0.05]。2、MTT法检测结果显示,用不同浓度的TAM处理细胞24h,与对照组MCF细胞相比,ERβ高表达可促进高浓度TAM(1、5、10μmol/L)对MCF-7细胞增殖的抑制作用[(45.788±1.641)%vs(24.288±1.170)%,(57.899±1.583)%vs(31.499±1.978)%,(59.853±1.648)%vs(38.039±1.482)%,均P0.05)],并且该抑制作用与TAM浓度呈剂量依赖关系;用rh IFN-γ(0.5,100ng/m L)预先处理72h,然后用10μmol/L TAM再处理24h,与对照组TAM组相比,rh IFN-γ(0.5,100 ng/m L)增加TAM对MCF-7、M/siα、M/siβ细胞增殖的抑制作用[(29.901±1.775)%,(40.209±1.083)%vs(25.066±1.122)%;(49.088±1.504)%,(52.254±2.223)%vs(46.088±1.288)%;(34.443±2.002)%,(50.125±1.554)%vs(20.977±1.724)%,P0.05],并且该抑制作用与rh IFN-γ浓度呈剂量依赖关系;半定量RT-PCR和Western Blot检测结果显示,与空白对照组相比,rh IFN-γ(0.5 ng/m L)明显增加MCF-7细胞中ERβm RNA的表达(0.248±0.0002 vs 0.184±0.0006,P0.05)和蛋白的表达(0.521±0.003 vs 0.356±0.019,P0.05)。3、半定量RT-PCR检测结果显示,ERβ高表达可显著抑制MCF-7细胞耐药基因MDR1、TOPOII、LRP的m RNA表达水平(0.431±0.032 vs 0.932±0.083,0.234±0.008 vs 0.391±0.002,0.47±0.028 vs 0.586±0.036;均P0.05);Western Blot检测结果显示,ERβ高表达可显著下调其Akt和ERK蛋白的磷酸化水平(0.224±0.006 vs 0.437±0.007,0.367±0.015 vs 0.756±0.039;均P0.05)。结论:1、人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231在培养96h以后,MCF-7的增殖水平要明显高于MDA-MB-231,这可能与乳腺癌细胞中不同ER亚型的表达有关,即ERα高表达促进乳腺癌细胞的增殖,ERβ高表达抑制细胞的增殖。2、ERβ可增加TAM对乳腺癌细胞的增殖抑制作用;rh IFN-γ增加乳腺癌细胞内ERβ的表达,并促进TAM对乳腺癌细胞增殖抑制作用。3、ERβ的表达水平可影响乳腺癌细胞MCF-7对TAM的耐药性,这可能与降低乳腺癌细胞中相关耐药基因(MDR1、TOPOII、LRP)的表达,以及抑制MAPK与PI3K/Akt信号通路活化有关。
【关键词】：ERβ TAM IFN-γ 耐药基因 Akt ERK
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 缩略语12-14
• 前言14-19
• 研究现状、成果14-18
• 研究目的、方法18-19
• 一、雌激素受体亚型对乳腺癌细胞增殖的影响19-34
• 1.1 对象和方法19-29
• 1.1.1 细胞19
• 1.1.2 主要试剂19
• 1.1.3 主要仪器和设备19-20
• 1.1.4 试剂的配制20-24
• 1.1.5 细胞培养24-25
• 1.1.6 半定量RT-PCR法检测MCF-7 和MDA-MB-231细胞中ERα 和ERβ的表达25-26
• 1.1.7 Western blot法检测MCF-7 和MDA-MB-231细胞中ERα 和ERβ的表达蛋白的表达26-29
• 1.1.8 MTT法检测MCF-7 和MDA-MB-231细胞增殖状况29
• 1.1.9.统计学方法29
• 1.2 结果29-31
• 1.2.1 MCF-7 和MDA-MB-231细胞中ERα 和ERβ mRNA水平的表达29-30
• 1.2.2 MCF-7 和MDA-MB-231细胞中ERα 和ERβ 蛋白的表达30
• 1.2.3 ERα 和ERβ 影响MCF-7 和MDA-MB-231细胞的增殖30-31
• 1.3 讨论31-32
• 1.4 小结32-34
• 二、TAM单独或联合人重组IFN-γ 对表达不同ER亚型的乳腺癌细胞增殖影响34-43
• 2.1 对象和方法34-36
• 2.1.1 细胞34
• 2.1.2 主要试剂34
• 2.1.3 主要仪器和设备34
• 2.1.4 主要试剂的配制34
• 2.1.5 细胞培养34
• 2.1.6 MTT法检测各乳腺癌细胞株对TAM的敏感性34-35
• 2.1.7 MTT法检测rhIFN-γ 对乳腺癌细胞株TAM耐药的影响35
• 2.1.8 半定量RT-PCR法检测人重组IFN-γ 对人乳腺癌细胞株MCF-7 ERβ 表达的影响35-36
• 2.1.9 Western Blot法检测人重组IFN-γ 对人乳腺癌细胞株MCF-7 ERβ 表达的影响36
• 2.1.10.统计学方法36
• 2.2 结果36-40
• 2.2.1 MTT法检测ERβ 不同表达的各乳腺癌细胞株对TAM的敏感性36-37
• 2.2.2 rhIFN-γ 对ERβ 不同表达的人乳腺癌细胞株MCF-7 TAM的耐药性的影响37-39
• 2.2.3 rhIFN-γ 对人乳腺癌细胞株MCF-7 ERβ mRNA水平表达的影响39-40
• 2.2.4 rhIFN-γ 对人乳腺癌细胞株MCF-7 ERβ 蛋白水平表达的影响40
• 2.3 讨论40-42
• 2.4 小结42-43
• 三、ERβ通过介导耐药基因的表达及信号通路PI3K/Akt和MAPK来调控TAM对乳腺癌细胞影响43-50
• 3.1 对象和方法43-44
• 3.1.1 细胞43
• 3.1.2 主要试剂43
• 3.1.3 主要仪器和设备43
• 3.1.4 主要试剂的配制43
• 3.1.5 半定量RT-PCR法检测耐药相关基因MDR1、TOPOII、LRP和GST-π的mRNA表达水平43-44
• 3.1.6 Western Blot法检测耐药相关信号通路MAPK、PI3K/Akt的p-ERK、p-Akt蛋白表达水平44
• 3.1.7.统计学方法44
• 3.2 结果44-47
• 3.2.1 ER亚型对乳腺癌MCF-7 细胞耐药相关基因mRNA表达水平的影响44-45
• 3.2.2 ER 亚型对乳腺癌 MCF-7 细胞 p-Akt 的蛋白表达水平的影响45-46
• 3.2.3 ER亚型对乳腺癌MCF-7 细胞p-ERK的蛋白表达水平的影响46-47
• 3.3 讨论47-49
• 3.4 小结49-50
• 结论50-51
• 参考文献51-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 在学期间发表论文情况56-57
• 综述 雌激素受体β对乳腺癌耐药机制的影响57-69
• 综述参考文献63-69
• 致谢69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2011版)[J];中国癌症杂志;2011年05期

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本文编号：527199