RhoGDI2基因及人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响

发布时间：2017-07-16 08:02

  本文关键词：RhoGDI2基因及人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响

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【摘要】：目的：膀胱癌是我国泌尿系肿瘤当中最常见的恶性肿瘤,易浸润、转移是膀胱癌最主要的特征。RhoGTP酶GDP解离抑制因子2 (rho GDP dissociation inhibitor 2, RhoGDI2)是近年来发现的抑制肿瘤迁移的基因之一,其在高迁移潜能的膀胱癌细胞中的表达量显著低于低迁移潜能细胞。内皮细胞一般对肿瘤均是促进作用,如果将RhoGDI2基因和人脐静脉内皮细胞放在一起,到底是促进大于抑制呢,还是抑制大于促进呢?本实验便是观察在人脐静脉内皮细胞共培养的Transwell模型下,RhoGDI2基因对人膀胱癌T24细胞的侵袭、迁移及增殖的影响。方法：设计并合成含有RhoGDI2基因过表达的GFP慢病毒载体,利用western blotting技术检测RhoGDI2基因在LV-RhoGDI2-GFP/T24、 LV-CONTROL-GFP/T24、T24三组蛋白水平表达之间的差异。利用Transwell模型和Matrigel基质胶检测三组细胞的侵袭能力的差异,利用Transwell模型检测三组细胞的迁移能力的差异,利用Transwell模型和CCK-8试剂检测三组细胞的增殖能力的差异。结果：本研究成功构建了RhoGDI2基因的慢病毒载体,western blotting技术检测到LV-RhoGDI2-GFP/T24的RhoGDI2的蛋白表达量明显高于LV-CONTROL-GFP/T24和T24组(P0.05)；在Transwell侵袭实验当中,无论是非共培养组还是共培养组,LV-RhoGDI2-GFP/T24组的侵袭的细胞数目明显少于LV-CONTROL-GFP/T24组及T24组(P0.05)。而各自细胞系自身的非共培养组和共培养组的比较当中,LV-RhoGDI2-GFP/T24非共培养组侵袭的细胞数和LV-RhoGDI2-GFP/T24共培养组侵袭的细胞数目无差异(P0.05),但是LV-CONTROL-GFP/T24非共培养组和T24非共培养组的侵袭的细胞数明显少于LV-CONTROL-GFP/T24共培养组和T24共培养组(P0.05)。在Transwell迁移实验当中,无论是非共培养组还是共培养组,LV-RhoGDI2-GFP/T24组的侵袭的细胞数目明显少于LV-CONTROL-GFP/T24组及T24组(P0.05)。而各自细胞系自身的非共培养组和共培养组的比较当中,LV-RhoGDI2-GFP/T24非共培养组侵袭的细胞数和LV-RhoGDI2-GFP/T24共培养组侵袭的细胞数目无差异(P0.05),但是LV-CONTROL-GFP/T24非共培养组和T24非共培养组的侵袭的细胞数明显少于LV-CONTROL-GFP/T24共培养组和T24共培养组(P0.05)。在增殖能力实验当中,无论是非共培养组还是共培养组,在第二天开始,LV-RhoGDI2-GFP/T24组的OD值明显小于LV-CONTROL-GFP/T24组及T24组(P0.05)。而各自细胞系自身的非共培养组和共培养组的比较当中,在第三天开始,LV-RhoGDI2-GFP/T24非共培养组OD值和LV-RhoGDI2-GFP/T24共培养组的OD值无差异(P0.05),但是LV-CONTROL-GFP/T24非共培养组和T24非共培养组的OD值明显小于LV-CONTROL-GFP/T24共培养组和T24共培养组(P0.05)。结论：RhoGDI2基因对T24膀胱癌的侵袭、迁移及增殖能力均有抑制作用；人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力均有促进作用；RhoGDI2基因可以“阻断”人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌的侵袭、迁移及增殖能力的促进作用。
【关键词】：RhoGDI2 膀胱癌 Transwell 人脐静脉内皮细胞 共培养 侵袭 迁移 增殖
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 个人简历3-6
• 主要英文缩写6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-21
• 参考文献18-21
• 慢病毒介导的RhoGDI2基因过表达人膀胱癌T24细胞的构建与验证21-35
• 1.1 材料与方法21-24
• 1.2 慢病毒的构建、包装及转染24-28
• 1.3 Western blotting检测慢病毒转染后T24膀胱癌细胞中的RhoGDI2的表达28-32
• 1.4 实验结果32-35
• 共培养模型下的RhoGDI2基因对人膀胱癌T24细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响35-56
• 1.1 材料与方法35-36
• 1.2 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞侵袭能力的影响36-39
• 1.3 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞迁移能力的影响39-41
• 1.4 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞增殖能力的影响41-44
• 1.5 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响实验结果44-56
• 讨论56-65
• 参考文献65-71
• 综述71-86
• 参考文献81-86
• 致谢86-87

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本文编号：547670