标签蛋白GST纳米抗体的制备以及rs11614913、rs2910164多态性与ESCC易感性的关联研究

发布时间：2017-07-17 17:35

  本文关键词：标签蛋白GST纳米抗体的制备以及rs11614913、rs2910164多态性与ESCC易感性的关联研究

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【摘要】：骆驼血清中存在着一种天然缺失轻链的重链抗体,克隆其可变区获得目前所知的最小抗原结合片段称为纳米抗体。纳米抗体与传统的抗体相比,具有分子量小、稳定性好,易于表达等独特的性质。在抗体药物的开发、医学检测、蛋白亲和纯化等方面具有广阔的发展前景。谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合标签是目前应用最为广泛的融合标签之一。该标签蛋白不仅被应用于蛋白质的亲和纯化,还被应用于融合蛋白的检测以及蛋白质之间的相互作用的检测。鉴于GST标签蛋白的重要功能以及纳米抗体所具有的特性,我们希望能够获得具有自主知识产权的GST蛋白特异性的纳米抗体。本研究采用原核系统表达并纯化抗原GST蛋白,免疫健康双峰驼,以其外周血为材料建立纳米抗体初级免疫文库。然后利用噬菌体展示技术筛选富集抗原特异性的纳米抗体,并通过ELISA获得与GST蛋白特异性结合的阳性单克隆。最后利用GST pull-down技术来验证我们得到的纳米抗体与抗原GST之间是否能够相互结合,以扩展其后期的应用。通过以上技术,我们成功构建了GST特异性的纳米抗体文库,并最终筛选获得该蛋白特异性的纳米抗体。此外,基于实验室的另外一个研究方向,我们还进行了基因多态性与癌症易感性的关联研究。食管癌是世界常见的恶性肿瘤之一,我国食管癌的发病类型主要以食管鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)为主。microRNA(mi RNA)是一种非编码RNA,可在转录后水平调控基因的表达,与癌症的发生、发展密切相关。位于miRNA上的SNP位点可以通过改变其表达量或结构来影响肿瘤的发生与发展。本研究通过数据库选定两个位于miRNA前体成熟区域的SNP位点miRNA-146a rs2910164(C/G)和miRNA-196a rs11614913(C/U)为研究对象,通过病例-对照的研究方法来检测这两个MirSNPs与ESCC易感性的关系。研究结果表明:在我们所研究的1400例ESCC病例和2185例正常对照人群中,rs11614913 TC位点与ESCC的发病风险具有显著相关性:与野生基因型TT相比,CC基因型能够显著增加ESCC的风险(OR=1.11,95%CI:1.01-1.22,P=0.049);在纯合子模型和隐性模型下进行分层分析显示,在非饮酒组中,CC基因型都能够显著增加ESCC的风险(纯合模型下:OR=1.14,95%CI:1.00-1.30,P=0.046,隐性模型下OR=1.13,95%CI:1.01-1.27,P=0.029)。但是对于已被证明与多种癌症相关的miRNA-146a rs2910164(C/G)位点,在我们的研究中未发现该位点与ESCC之间存在显著的相关性。
【关键词】：GST 纳米抗体 噬菌体展示 ESCC MirSNP
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q503;R735.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一部分 标签蛋白GST纳米抗体的制备10-49
• 第一章 序言10-16
• 1.1 抗体及抗体库技术10-11
• 1.2 纳米抗体技术的研究进展11-15
• 1.3 谷胱甘肽S-转移酶（GST）在生物研究领域的应用15-16
• 第二章 抗原蛋白GST的表达与纯化16-22
• 2.1 材料与方法17-20
• 2.2 实验结果20-21
• 2.3 讨论21-22
• 第三章 纳米抗体噬菌体展示文库的构建22-35
• 3.1 材料与方法23-31
• 3.2 实验结果31-34
• 3.3 讨论34-35
• 第四章 抗GST纳米抗体的富集筛选及纯化鉴定35-44
• 4.1 材料与方法35-39
• 4.2 实验结果39-43
• 4.3 讨论43-44
• 第五章 结论44-45
• 参考文献45-49
• 第二部分 rs11614913、rs2910164多态性与ESCC易感性的关联研究49-68
• 第一章 绪论49-52
• 1.1 食管癌的现状49
• 1.2 单核苷酸多态性与microRNA49-50
• 1.3 食管癌相关的microRNA50-51
• 1.4 rs11614913、rs2910164的分析现状51-52
• 第二章 rs11614913、rs2910164与ESCC易感性的分析52-63
• 2.1 材料与方法52-57
• 2.2 实验结果57-61
• 2.3 讨论61-63
• 2.4 结论63
• 参考文献63-68
• 攻读硕士期间发表论文68-69
• 致谢69-70

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本文编号：554610