PRMT2在乳腺癌MCF-7细胞中通过PPARγ对Akt磷酸化的影响

发布时间：2017-07-19 14:12

  本文关键词：PRMT2在乳腺癌MCF-7细胞中通过PPARγ对Akt磷酸化的影响

  更多相关文章： 蛋白质精氨酸甲基转移酶2 过氧化物酶体增殖激活受体γ 磷酸化蛋白激酶B 乳腺癌细胞

【摘要】：目的:研究在乳腺癌MCF-7细胞中,PRMT2通过PPARγ对Akt磷酸化的影响,并初步探讨PRMT2对乳腺癌干细胞的影响,为乳腺癌的内分泌治疗提供新思路。方法:以MCF-7-PRMT2稳定高表达细胞株及MCF-7细胞株为研究对象,研究在乳腺癌MCF-7细胞中PRMT2通过PPARγ对Akt磷酸化的影响以及PRMT2对乳腺癌干细胞的影响。实验包括4部分:(1)利用蛋白质免疫印迹法,检测MCF-7细胞中稳定高表达PRMT2对p-Akt、p-GSK-3β、CyclinD1、PPARγ蛋白表达水平的影响;(2)通过免疫共沉淀技术明确PRMT2与PPARγ是否存在相互作用;(3)利用蛋白质免疫印迹法,检测MCF-7细胞中稳定高表达PRMT2及低表达PPARγ共同对p-Akt蛋白表达水平的影响;(4)通过流式细胞术,检测PRMT2对乳腺癌干细胞(CD44~+/CD24-)的影响。结果:1.Western Blot结果显示:在MCF-7细胞中,PRMT2稳定高表达下调p-Akt、p-GSK-3β、CyclinD1蛋白的表达,而对PPARγ的表达无明显影响。2.免疫共沉淀结果显示:在MCF-7乳腺癌细胞中,PRMT2与PPARγ存在相互作用。3.Western Blot结果显示:在MCF-7细胞中,沉默PPARγ对PRMT2的表达没有影响但能增加p-Akt蛋白的表达,在此基础上,稳定高表达PRMT2能降低p-Akt蛋白的表达,而在高表达PRMT2的基础上沉默PPARγ,p-Akt蛋白的表达明显增加。4.流式细胞术结果显示:稳定高表达PRMT2的MCF-7细胞株与对照组相比,乳腺癌干细胞(CD44~+/CD24-)的比例减少,有统计学意义(P0.05)。结论:1.在乳腺癌MCF-7细胞中,PRMT2可能部分通过与PPARγ结合发挥作用,抑制Akt磷酸化。2.PRMT2高表达能降低乳腺癌MCF-7细胞中CD44~+/CD24-细胞比例。
【关键词】：蛋白质精氨酸甲基转移酶2 过氧化物酶体增殖激活受体γ 磷酸化蛋白激酶B 乳腺癌细胞
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-11
• 第1章 前言11-15
• 第2章 实验材料15-21
• 2.1 细胞株15
• 2.2 质粒构建15
• 2.3 主要试剂、耗材及来源15-16
• 2.4 主要溶液配制16-20
• 2.5 主要仪器20-21
• 第3章 实验方法21-28
• 3.1 细胞培养21
• 3.2 Western blot检测PRMT2对增殖相关蛋白的影响21-23
• 3.3 免疫共沉淀23-24
• 3.4 Western blot检测shRNA介导的PPARγ基因沉默24-25
• 3.5 Western blot检测PRMT2与PPARγ 共同对p-Akt的影响25-26
• 3.6 流式细胞术26
• 3.7 统计学处理26-28
• 第4章 实验结果28-36
• 4.1 PRMT2高表达对MCF-7 细胞增殖相关蛋白表达的影响28-30
• 4.2 MCF-7 细胞中 PPARγ 与 PRMT2 的相互作用情况30
• 4.3 沉默PPARγ对MCF-7细胞中PRMT2、p-Akt蛋白表达的影响30-33
• 4.4 PRMT2及PPARγ共同对MCF-7细胞中p-Akt蛋白表达的影响33-34
• 4.5 PRMT2高表达对乳腺癌干细胞（CD44~+/CD24~-）的影响34-36
• 第5章 讨论36-40
• 第6章 结论40-42
• 参考文献42-46
• 综述46-55
• 参考文献50-55
• 致谢55

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 任黔川;彭芝兰;谭欣;;PPARγ在卵巢浆液性囊腺癌中的表达[J];重庆医学;2009年23期

2 张乾勇;PPAR的结构与功能及其生物学作用[J];国外医学(卫生学分册);2000年05期

3 白玉杰,牛丹,赵锦荣,张文红,吕贯廷,阎小君;Rapid detection of PPAR_γ gene Pro12Ala polymorphism with fluorescence polarization in Chinese population[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2003年03期

4 袁平戈;PPARα的主要功能是什么[J];中华肝脏病杂志;2003年05期

5 潘光栋;PPAR-γ及其配体在人体细胞的分子研究[J];职业卫生与病伤;2003年02期

6 曹廷兵,叶治家,彭家和,巩燕,黄刚;人PPARγ2 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化[J];第三军医大学学报;2004年01期

7 王刚,陈继俊,倪沛洲;PPARα受体亚型与新药研究[J];药学进展;2004年01期

8 叶平;过氧化体增殖物激活型受体(PPAR)与心血管疾病[J];中华心血管病杂志;2004年07期

9 孙曙光,周智广;PPARγ与1型糖尿病[J];国外医学.内分泌学分册;2005年02期

10 胡桂芳,武革;PPARγ与2型糖尿病大血管病变的研究进展[J];广东医学院学报;2005年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 ;Genetic polymorphisms of PPAR-γ,HHEX,PTPRD,KCNQ1,and SRR affect therapeutic efficacy of Pioglitazone in Chinese Patients with type 2 diabetes[A];传承与发展，，创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年

2 ;Dynamic analysis and ligand binding affinity investigation of PPAR mutations[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年

3 童南伟;;过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)a与脂质代谢[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年

4 王伟铭;章慧娣;刘峰;陈佳韵;陈楠;;PPARγ活化对肾间质成纤维细胞的作用研究[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

5 陈刚;林新富;梁继兴;林丽香;沈晓丽;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因多态性与老年男性骨质疏松症相关性研究[A];2008内分泌代谢性疾病系列研讨会暨中青年英文论坛论文汇编[C];2008年

6 陈刚;林新富;梁继兴;林丽香;沈晓丽;;过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因多态性与老年男性骨质疏松症相关性研究[A];2008中国医师协会内分泌代谢科医师分会年会论文汇编[C];2008年

7 李洁;戴爱国;胡瑞成;朱黎明;王梅芳;;PPARγ影响γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性及表达在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

8 管又飞;;脂质过氧化物体增殖物激活受体γ(PPAR γ)与糖尿病肾病[A];中华医学会肾脏学分会2004年年会暨第二届全国中青年肾脏病学术会议专题讲座汇编[C];2004年

9 孙莉;尚进林;梁浩;程焱;;PPAR全激动剂对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

10 ;Endothelial PPARγmediates anti-inflammatory actions of rosiglitazone through dissociation of NF-κB[A];中国生理学会心血管生理学术研讨会论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 徐铮奎;发现PPAR拮抗剂[N];医药经济报;2012年

2 曾凡新邋林敏;PPAR激动剂类抗糖尿病药研发喜忧参半[N];中国医药报;2007年

3 袁松范;开发PPAR多通道激动剂须谨慎[N];中国医药报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘炳婷;SUMO特异性蛋白酶1调控脂肪形成的作用及分子机制[D];上海交通大学;2014年

2 陈宏;巨噬细胞PPARγ对皮肤伤口愈合的作用研究[D];第三军医大学;2015年

3 韩晶;PPARγ在脑缺血再灌注损伤和过氧化氢损伤中的调控机制研究[D];天津医科大学;2014年

4 张岩;PPARα/γ信号通路在高脂性脂肪性肝炎发病机制中的作用研究[D];苏州大学;2015年

5 张鸥;阿托伐他汀对动脉粥样硬化患者外周血中PPAR γ的作用研究及相关炎症因子与动脉粥样硬化关系的建模分析[D];郑州大学;2016年

6 周毅;PPARγ介导的抗氧化机制在血管平滑肌细胞表型转化中作用和机制研究[D];第三军医大学;2016年

7 滕志朋;PPARβ/δ在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及其机制研究[D];重庆医科大学;2016年

8 佟强;PPARβ/δ激活在帕金森病中的保护作用及机制研究[D];南京医科大学;2016年

9 王伶;高静水压刺激对血小板活化的影响及PPARγ的保护作用的研究[D];南昌大学;2008年

10 孙晶;PPARγ1对系膜细胞外基质生成的抑制作用及其机制[D];复旦大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 曹智丽;过氧化物酶增殖物激活受体α（PPARα）在大鼠酒精性肝病发生过程中的变化[D];河北医科大学;2015年

2 宋石;miR-27a通过靶向调控PPARγ对酒精诱导大鼠BMSC分化的影响[D];郑州大学;2015年

3 邹佳楠;PPAR-γ在IgA肾病发生中的作用及其机理研究[D];复旦大学;2014年

4 陶晓燕;PPAR δ激动剂和siRNA对大鼠骨髓基质干细胞及成骨细胞分化和矿化的作用研究[D];安徽医科大学;2015年

5 于飞;新型PPARγ激动剂对人肾癌细胞增殖抑制及其机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

6 何修界;PPARγ激活对GDM小鼠胎盘脂肪酸运输蛋白表达水平的影响[D];安徽医科大学;2015年

7 魏璇;PPARγ通过对RUVBL2表达调控影响脂联素分泌的研究[D];华中农业大学;2015年

8 游洁冰;PPARγ激动剂、胰岛素通过上调负性炎性因子TIPE2的表达抑制高糖、Aβ1-40引起的炎性反应及神经细胞调亡[D];山东大学;2015年

9 刘常为;CTGF、COL-I、PPARγ在卵巢细胞外基质的表达及与多囊卵巢综合征的关系[D];暨南大学;2015年

10 曹小洁;TLR4通过PPARγ下调ABCG1表达促进血管平滑肌细胞内炎症反应及脂质沉积[D];第三军医大学;2015年

本文编号：563279