CCDC8基因对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的作用及与ANKRA2、LKB1、14-3-3σ之间相互关系的研究

发布时间：2017-07-25 15:09

  本文关键词：CCDC8基因对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的作用及与ANKRA2、LKB1、14-3-3σ之间相互关系的研究

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【摘要】：[目的]近年来乳腺癌有年轻化的趋势,而三阴性乳腺癌中年轻患者居多。三阴性乳腺癌被认为是多阶段、多因素、多基因共同作用的结果,该实验选用三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过沉默该株细胞的CCDC8基因,观察其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨在该细胞系中CCDC8基因与ANKRA-2、LKB-1及14-3-3几个基因间的相互关系。[方法]1、以CCDC8 RNA中944、1860、1979为作用靶点合成三条siRNA干扰片段并用脂质体法转染MDA-MB-231细胞,同时设NC作为阴性对照组。2、通过观察荧光及RT-PCR筛选稳定细胞转染株。3、MTT检测稳定转染组CCDC8-1860与阴性对照组的细胞增殖能力变化。4、用细胞划痕的方法检测稳定转染组CCDC8-1860与阴性对照组的细胞迁移能力变化。5、用流式细胞术(flow cytometry)分析稳定转染组CCDC8-1860对MDA-MB-231细胞周期、凋亡率变化。6、用平板细胞克隆实验分析稳定转染组CCDC8-1860细胞增殖能力和群体依赖性。7、实时荧光定量PCR和western blotting检测CCDC8-1860作用后MDA-MB-231细胞中CCDC8、ANKRA-2、LKB-1及14-3-3σ几个基因的RNA和蛋白的表达。[结果]1、RT-PCR检测显示其中1860.siRNA能有效抑制CCDC8-mRNA(p＜0.05).2.MTT检测显示CCDC8-1860转染MDA-MB-231细胞后细胞增殖受到显著抑制(p0.05)；3、细胞划痕实验显示经CCDC8-1860转染MDA-MB-231细胞后迁移速度明显减慢(p0.05)；4、流式细胞术检测结果显示CCDC8-1860转染MDA-MB-231细胞后凋亡率显著增加且细胞周期阻滞于G1期(p0.05)；5、平板细胞克隆实验结果显示CCDC8-1860转染MDA-M-B231细胞克隆形成率降低,增殖能力减弱(p0.05)。6.qt-PCR及Western blotting结果显示：a、.经CCDC8-1860转染后,CCDC8基因及蛋白表达均降低；b、经CCDC8-1860转染后,与阴性对照组对比实验组ANKRA2基因及蛋白表达均增强；c、经CCDC8-1860转染后,LKB1基因及蛋白表达均增强；d、经CCDC8-1860转染后,14-3-3 σ蛋白表达未见明显变化。[结论]1、干扰CCDC8基因的表达可明显抑制三阴性乳腺肿瘤细胞株MDA-MB-231的增殖,减低其迁移速度,促进MDA-MB-231乳腺癌细胞的凋亡。2、干扰CCDC8基因在MDA-MB-231的表达使ANKRA2表达明显增强；抑带CCDC8的表达后LKB1的RNA及蛋白表达均增强；抑制CCDC8的表达后14-3-3σ的RNA及蛋白表达未见明显变化。
【关键词】：CCDC8 乳腺癌细胞MDA-MB-231 小干扰RNA 细胞增殖 细胞侵袭
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英文缩略词表6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 材料与方法15-33
• 实验材料15-19
• 实验方法19-33
• 实验结果33-55
• 1 细胞培养33
• 2 筛选最佳干扰序列33-38
• 3 MTT结果38-39
• 4 流式细胞学结果39-42
• 5 细胞划痕实验结果42-44
• 6 细胞平板克隆实验结果44-46
• 7 si-RNA转染MBA-MB-231细胞后mRNA变化46-52
• 8 Western blotting结果52-55
• 讨论55-61
• 1 CCDC8基因讨论55-56
• 2 CCDC8与ANKRA2、LKB-1、14-3-3基因相互关系讨论56-61
• 结论61-62
• 参考文献62-66
• 综述66-73
• 参考文献70-73
• 攻读学位期间获得的学术成果73-74
• 致谢74

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1 贺兰湘,张先林;家族性乳腺癌遗传易感基因研究现状[J];国外医学.遗传学分册;2000年05期

2 裴晓华,马秀t，

本文编号：571900