DAPT抑制具有干细胞特性的三阴性乳腺癌细胞系增殖的体内外研究

发布时间：2017-07-29 07:07

  本文关键词：DAPT抑制具有干细胞特性的三阴性乳腺癌细胞系增殖的体内外研究

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【摘要】：目的:验证DAPT对具有干细胞特性的三阴性乳腺癌细胞系的抑制作用,并初步探究其作用机制。方法:体外培养三阴乳腺癌细胞株HCC38和HCC1806,通过ALDEFLUOR试剂盒分选出ALDH1阳性的细胞,按照所给予的药物不同,将细胞分成三组:空白对照组(加入生理盐水)、实验组(加入不同浓度DAPT)和阳性对照组(加入多西他赛)。1.利用ALDEFLUOR试剂盒,流式分选出ALDH阳性的HCC38细胞。2.通过微球体实验,验证HCC38细胞系中较高的肿瘤干细胞比例。3.MTT法检测抑制剂DAPT对处理后HCC38细胞体外增殖的抑制效应。4.应用流式细胞仪检测DAPT对细胞凋亡的影响。5.Western blot试验检测Notch信号通路下游关键蛋白Notch1表达水平。6.Transwell侵袭试验证明HCC38细胞的侵袭能力。7.接种HCC38或HCC1806于裸鼠,观察DAPT对裸鼠体内肿瘤的抑制作用结果:HCC38细胞在无血清培养下能够形成微球体(MSs),富含ALDH阳性细胞。与空白对照组相比,DAPT不仅能显著杀伤微球体,并且比阳性对照组(多西他赛)作用更明显。DAPT不仅能够抑制HCC38细胞的生长、诱导HCC38细胞凋亡,还可以降低HCC38细胞的侵袭力、抑制HCC38细胞的Notch1蛋白表达,DAPT在裸鼠体内的抑瘤作用明显,能够有效遏制肿瘤的生长。结论:Notch信号转导通路的抑制剂DAPT通过抑制Notch下游蛋白Notch1表达,可选择性的杀伤乳腺癌干细胞,以此为靶点,对治疗三阴性乳腺癌提供新的契机。
【关键词】：Notch 三阴乳腺癌 HCC38 HCC1806 ALDH1 肿瘤干细胞 DAPT
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 前言4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-14
• 第1章 绪论14-16
• 第2章 综述16-23
• 2.1 肿瘤干细胞假说和克隆进化模型17
• 2.2 鉴别肿瘤干细胞的方法与途径17-18
• 2.3 乳腺癌干细胞标记物18-20
• 2.4 乳腺癌干细胞靶向治疗20-21
• 2.5 展望21-23
• 第3章 材料与方法23-31
• 3.1 实验材料23-24
• 3.1.1 细胞和裸鼠23
• 3.1.2 试剂及耗材23-24
• 3.2 实验方法24-30
• 3.2.1 细胞培养24
• 3.2.2 利用ALDEFLUOR试剂盒，，分选出ALDH阳性的HCC38细胞24-25
• 3.2.3 MTT法检测DAPT对HCC38细胞体外增殖的抑制效应25-26
• 3.2.4 流式细胞仪检测DAPT对细胞凋亡的影响26-27
• 3.2.5 Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭性27-28
• 3.2.6 无血清悬浮培养人乳腺癌细胞微球体(mammoshperes)证明HCC38 细胞的干细胞特性28-29
• 3.2.7 Western蛋白印迹试验检测DAPT作用后Notch1蛋白表达水平29-30
• 3.2.8 观测DAPT抑制裸鼠体内肿瘤的作用30
• 3.3 统计学分析30-31
• 第4章 结果31-37
• 4.1 DAPT随时间及浓度梯度对HCC38细胞生长的影响31-32
• 4.2 DAPT对人乳腺癌细胞株HCC38凋亡作用的影响32-33
• 4.3 DAPT对HCC38细胞株体外细胞侵袭能力的影响33-34
• 4.4 无血清悬浮培养HCC38细胞证明其肿瘤干细胞特性34-35
• 4.5 DAPT对HCC38细胞NOTCH1蛋白的抑制作用35
• 4.6 DAPT对裸鼠体内肿瘤生长的抑制作用35-37
• 第5章 讨论37-40
• 5.1 DAPT对乳腺癌作用的研究37
• 5.2 NOTCH信号通路与乳腺癌干细胞的研究37-38
• 5.3 NOTCH信号通路与乳腺癌干细胞其他信号通路的研究38-40
• 第6章 结论40-41
• 参考文献41-52
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果52-53
• 致谢53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 彭功玲;田野;逯

本文编号：587914