叶酸缺乏联合PLK1 siRNA对胃癌细胞多态性的影响

发布时间：2017-08-04 06:32

  本文关键词：叶酸缺乏联合PLK1 siRNA对胃癌细胞多态性的影响

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【摘要】：目的:观察PLK1 siRNA、叶酸缺乏及其二者联合联合后对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜细胞GES-1 FR-α表达、MTHFR多态性和肿瘤基因Bcl-2、P53的影响,以及在叶酸缺乏环境得以纠正后,上述影响可否消失;方法:将胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜细胞株GES-1分别放置于PLK1 siRNA干扰、叶酸缺乏、PLK1 siRNA干扰联合叶酸缺乏以及叶酸缺乏环境恢复后再进行PLK1 siRNA干扰的条件下培养一段时间,先通过Real-time PCR检测各细胞株FR-α、Bcl-2、P53 m RNA表达;再通过Western blot检测各细胞株FR-α、Bcl-2、P53蛋白表达;最后将实验细胞采用PCR-RFLP法以及基因芯片技术检测MTHFR多态性;结果:1、经过Real-time PCR检测,PLK1 siRNA干扰后,实验细胞FR-α、Bcl-2m RNA表达较对照组明显降低,而P53 m RNA表达较对照组明显升高(p0.05);而当叶酸缺乏时,实验细胞FR-αm RNA表达较对照组明显升高(p0.05),但P53、Bcl-2 m RNA表达无明显变化;当叶酸缺乏联合PLK1 siRNA干扰后,二者表现出拮抗作用,但倾向于单独PLK1 siRNA干扰时作用;当叶酸缺乏环境恢复后,二者的拮抗作用随之消失。2、经Western blot检测,PLK1 siRNA干扰后,实验细胞FR-α、Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低,而P53蛋白表达较对照组明显升高(p0.05),当叶酸缺乏时,结果相反;当叶酸缺乏联合PLK1 siRNA干扰后,二者表现出拮抗作用,但倾向于单独PLK1 siRNA干扰时作用;当叶酸缺乏环境恢复后,二者的拮抗作用随之消失;3、成功扩增出MTHFR基因含677位点和含1298位点的两个片段,通过基因直接测序,在677位点除细胞N87没有突变,其余细胞均由C突变成T,而在1298位点,实验细胞均未发生基因突变。结论:1、PLK1 siRNA以及叶酸缺乏可能通过Bcl-2、P53以及FR-α基因影响胃癌的发生发展;2、PLK1 siRNA干扰与叶酸缺乏联合时有拮抗作用,但短暂叶酸缺乏的影响是可逆的,补充叶酸后可能会阻止正常胃粘膜细胞的癌性转化、抑制胃癌细胞的进展;3、FR-α是一个潜在的肿瘤标志物,可能与癌基因Bcl-2相类似,而与抑癌基因P53相反,是一个潜在的癌基因;4、MTHFR具有多种变异型,MTHFR C677T位点多态性可能是胃癌的遗传易感因素。
【关键词】：叶酸 PLK1 siRNA 胃癌细胞 叶酸受体-α 肿瘤基因 MTHFR多态性
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 符号说明11-12
• 1、绪论12-14
• 2、材料与方法14-33
• 2.1 Real-time PCR检测各基因表达14-21
• 2.1.1 主要试剂14-15
• 2.1.2 主要仪器15
• 2.1.3 细胞与细胞株培养15
• 2.1.4 PLK1 siRNA干扰15-16
• 2.1.5 叶酸缺乏16-17
• 2.1.6 PLK1 siRNA干扰和叶酸缺乏联合17-18
• 2.1.7 叶酸缺乏环境恢复正常后，，进行 PLK1 siRNA 干扰18-19
• 2.1.8 Real-time PCR检测mRNA表达19-21
• 2.1.9 统计分析21
• 2.2 Western blot检测各蛋白的表达21-28
• 2.2.1 主要试剂21-22
• 2.2.2 主要试剂的配制22-23
• 2.2.3 Western Blot主要仪器设备23-24
• 2.2.4 实验原理24
• 2.2.5 实验步骤24-28
• 2.2.6 统计分析28
• 2.3 MTHFR基因多态性检测28-33
• 2.3.1 主要试剂28-29
• 2.3.2 细胞株与细胞培养29
• 2.3.3 DNA提取29
• 2.3.4 引物设计29-30
• 2.3.5 PCR扩增30-31
• 2.3.6 MTHFR基因酶切验证31-32
• 2.3.7 MTHFR基因直接测序32-33
• 3、结果33-44
• 3.1 Real-time PCR检测FR-α、BCL-2、P53基因表达结果33-38
• 3.2 Western blot检测FR-α、BCL-2、P53蛋白的表达结果38-42
• 3.3 MTHFR基因多态性检测结果42-44
• 4、讨论44-49
• 5、结论49
• 参考文献49-58
• 致谢58-59
• 攻读学位期间发表的学术论文59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 Elisa Fabbri;Lisa Rustignoli;Antonio Muscari;Giovanni M Puddu;Maria Guarino;Rita Rinaldi;Elena Minguzzi;Giacomo Caio;Marco Zoli;Umberto Volta;;Recurrent ischemic strokes in a young celiac woman with MTHFR gene mutation[J];World Journal of Gastroenterology;2012年26期

2 兰斌;刘炳亚;陈雪华;瞿颖;张晓青;蔡劬;戴起宝;朱正纲;;保罗样激酶1表达抑制导致胃癌MKN45细胞有丝分裂停滞[J];中华肿瘤杂志;2006年03期

3 ;Induction of apoptosis by arsenic trioxide and hydroxycamptothecin in gastric cancer cells in vitro[J];World Journal of Gastroenterology;2000年04期

本文编号：618151