bFGF单抗联合Lobaplatin抑制肺腺癌细胞增殖、转移和诱导凋亡的机制研究

发布时间：2017-08-04 06:22

  本文关键词：bFGF单抗联合Lobaplatin抑制肺腺癌细胞增殖、转移和诱导凋亡的机制研究

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【摘要】：目的:(1)探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(b FGF单抗)联合Lobaplatin(LBP)对肺癌细胞系A549细胞增殖、凋亡和转移的影响及其可能的作用机制。(2)系统评价Lobaplatin联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和安全性。方法:制备腹水型bFGF单抗,体外培养肺腺癌A549细胞,将细胞分为四组(control组、b FGF单抗组、LBP组及b FGF单抗+LBP组)处理48h。(1)CCK-8法测定其对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测药物作用后细胞周期分布的变化,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D的表达水平。(2)流式细胞仪检测药物作用A549细胞凋亡,DAPI染色激光共聚焦显微镜下观察细胞凋亡过程中细胞核的变化,western blot法检测细胞凋亡PI3K/Akt信号通路有关蛋白bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP及BAX、cleave-caspase-3、cleave-caspase-9、cleave-PARP的表达变化。(3)划痕实验及Transwell小室检测不同药物分组对A549细胞侵袭及迁移能力的影响,Western blot法检测细胞侵袭迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达。(4)计算机检索Cochrane Library、Pub Med、EMBase、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文期刊数据库、万方数据库,纳入LBP联合化疗对比顺铂联合化疗治疗晚期NSCLC的随机对照试验(PCT),根据纳入与排除标准筛选后,运用改良后的Jadad量表评价纳入文献的方法学质量,并采用Cochrane协作网提供的Rev Man5.2统计学软件进行Meta分析。结果:(1)CCK-8结果显示不同的药物分组可抑制A549细胞的增殖,并以bFGF单抗+LBP对肺癌A549细胞增殖作用最为明显,流式细胞仪检测结果发现b FGF单抗联合LBP可抑制A549细胞周期的进行,阻止细胞周期在G0/GI期。Western blot检测结果表明b FGF单抗和LBP可下调细胞内CDK4和cyclin D的表达。(2)流式细胞仪检测结果显示b FGF单抗,LBP单独及联合可诱导A549细胞凋亡。DAPI染色激光共聚焦显微镜下发现可引起细胞核固缩、核裂解。Western blot结果表明b FGF单抗联合LBP通过下调bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表达,上调BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表达来诱导A549细胞的凋亡。(3)划痕实验和Transwell小室基质胶实验显示b FGF单抗,LBP单独及联合可抑制A549细胞侵袭迁移能力。Western blot检测结果发现药物作用后可下调MMP-2和MMP-9蛋白表达来阻断细胞的侵袭迁移。(4)共纳入11项RCT,合计724例患者。Meta分析结果显示,试验组患者的客观缓解率[RR=0.96,95%CI(0.79,1.16),P=0.65]、白细胞减少发生率[RR=0.95.,95%CI(0.83,1.08),P=0.42]和血小板减少发生率[RR=0.96,95%CI(0.80,1.15),P=0.68]与对照组比较差异无统计学意义;但试验组患者恶心呕吐发生率[RR=0.55,95%CI(0.46,0.64),P0.05]、腹泻发生率[RR=0.43,95%CI(0.31,0.61),P0.05]显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义。结论:(1)b FGF单抗联合LBP作用于细胞48h后可抑制肺腺癌A549细胞的增殖,阻止细胞由G1期进入S期、G2期进入M期,其作用机制可能是下调细胞内CDK4和cyclin D的表达发挥生物学作用。(2)b FGF单抗联合LBP作用于细胞48h后可促进肺腺癌A549细胞的凋亡,形态学观察可以看到引起细胞核固缩、核裂解,其机制可能与改变细胞内PI3K/Akt信号通路,下调bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表达,上调BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表达有关。(3)b FGF单抗和LBP单药和联合作用均可阻止肺腺癌A549细胞的转移,两药联合应用对A549细胞具有协同作用。这一效应可能与特异性的引起基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9表达变化有关。(4)LBP联合化疗治疗NSCLC患者的疗效与顺铂联合化疗相当,但安全性优于后者。由于纳入研究的样本量偏小,质量较低,该结果尚需大样本、多中心的RCT进一步验证。
【关键词】：非小细胞肺癌 碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体 LBP 增殖 凋亡
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-16
• 第一部分 bFGF单抗的制备16-25
• 1.1 材料16-17
• 1.2 实验方法17-21
• 1.3 实验结果21-23
• 1.4 讨论23-25
• 第二部分 bFGF单抗与Lobaplatin联合抑制肺腺癌A549 细胞增殖的研究25-35
• 2.1 材料25-27
• 2.2 实验方法27-30
• 2.3 实验结果30-32
• 2.4 讨论32-35
• 第三部分 bFGF单抗与Lobaplatin联合诱导肺腺癌A549 细胞凋亡的研究35-48
• 3.1 材料35-37
• 3.2 实验方法37-39
• 3.3 实验结果39-45
• 3.4 讨论45-48
• 第四部分 bFGF单抗与Lobaplatin联合抑制肺腺癌A549 细胞侵袭迁移作用的研究48-56
• 4.1 材料48-50
• 4.2 实验方法50-52
• 4.3 实验结果52-54
• 4.4 讨论54-56
• 参考文献56-62
• 第五部分 Lobaplatin对比顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效与安全性的Meta分析62-77
• 1 资料与方法62-63
• 2 结果63-73
• 3 讨论73-75
• 参考文献75-77
• 全文总结77-78
• 附录78-80
• 硕士期间发表论文80-81
• 致谢81

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 曾洪生;郭其森;傅玲;;吉西他滨联合洛铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效分析[J];山东医药;2011年19期

2 潘兰红;徐萌;曾世彬;陈文慧;李汉初;盛良翮;朱新海;向军俭;邓宁;;碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体在小鼠体内药代动力学研究[J];中国药理学通报;2011年11期

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4 ;ShRNA-mediated gene silencing of β-catenin inhibits growth of human colon cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2007年48期

5 赵延江;;紫杉醇加洛铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及安全性评价[J];中国实用医药;2013年13期

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本文编号：618097