恢复SFRP1基因表达对MGC803细胞增殖迁移的影响

发布时间：2017-08-09 08:19

  本文关键词：恢复SFRP1基因表达对MGC803细胞增殖迁移的影响

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【摘要】：目的:胃癌在我国属最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率居各类恶性肿瘤的第二位。由于胃癌早期临床症状不明显,多数患者确诊时已属中晚期,然而接受姑息性化疗的晚期胃癌患者5年生存率小于10%。因此,寻找新的治疗靶点、研发新的化疗药物,对胃癌的治疗具有重大意义。最新研究表明,Wnt信号通路的异常激活与多种肿瘤的发生发展密切相关,细胞表观遗传改变,导致抑瘤基因沉默是肿瘤的常见事件。由于抑瘤基因甲基化具有可逆性,故通过甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-d C)处理胃癌MGC-803细胞,分析MGC-803细胞SFRP1表达水平及对细胞生物学行为的影响,为探讨5-Aza-d C在治疗胃癌临床应用提供实验依据。方法:1.体外培养胃癌MGC-803细胞,取对数生长期细胞,随机分为空白对照组、1umol/L 5-Aza-d C处理组、5umol/L 5-Aza-d C处理组、10umol/L 5-Aza-d C处理组和20 umol/L5-Aza-d C处理组umol/L。2.用噻唑蓝MTT法检测各组在0h、12h、24h、48h的OD值,观察5-Aza-Cd对MGC-803细胞生长抑制作用,绘制生成曲线抑制图,根据MTT结果初步筛选抑制率较高浓度。3.取该浓度5-Aza-d C,分别作用细胞0h、12h、24h、48h,提取药物作用后细胞的RNA及蛋白,分别采用RT-PCR和Western blot实验检测5-Aza-d C干预不同时间后人胃癌MGC803细胞中SFRP1及β-catenin m RNA和蛋白表达的情况;4.应用划痕实验探讨5-Aza-d C对MGC-803细胞迁移能力的影响。结果:1.MTT结果显示,5-Aza-Cd对MGC-803细胞生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系;2.RT-PCR结果显示,SFRP1基因m RNA水平较未处理组升高(p0.01),而β-catenin m RNA水平较未处理组降低(p0.01),两者m RNA表达水平呈负相关,且具有时间依赖性。3.Western blot结果显示,SFRP1基因蛋白水平较未处理组升高(p0.01),与SFRP1基因m RNA表达水平一致,β-catenin蛋白表达水平较未处理组降低,与β-catenin m RNA表达水平一致。4.划痕实验结果显示:12小时5μmol/L组MGC-803细胞愈合率为(47.8%±3.1%)、10μmol/L组MGC-803细胞愈合率为(18.2%±2.8%)与对照组(54.5.0%±1.6%)比较p0.05,有统计学意义;划痕24小时后5μmol/L组MGC-803细愈合率为(82.7%±1.9%),10μmol/L组MGC-803细胞愈合率为(45.5%±1.3%),与对照组(91%±2.5%)比较p0.05,有统计学意义;结论:1.5-Aza-d C可抑制MGC-803细胞增殖,使其迁移能力降低,其作用呈时间和浓度依赖性。2.5-Aza-d C可能通过恢复SFRP1基因表达,从而发挥抑制MGC-803细胞增殖和迁移的作用。
【关键词】：胃癌 Wnt 5-Aza-dC SFRP1
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 中英文词对照表11-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 材料和方法16-26
• 第3章 结果26-34
• 第4章 讨论34-38
• 第5章 结论38-40
• 参考文献40-46
• 文献综述46-56
• 参考文献52-56
• 硕士期间发表论文56-58
• 致谢58

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 伍丹;伍尤华;;Wnt拮抗因子SFRP1与肿瘤相关性的研究进展[J];现代医药卫生;2015年07期

2 薛猛;王良静;;结直肠癌基因DNA甲基化标志物筛查的价值[J];世界华人消化杂志;2015年29期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 李金平;抑癌基因OPCML在人乳腺癌中的表达、甲基化状态及生物学功能的研究[D];重庆医科大学;2013年

2 甘平;蓝萼甲素对神经胶质瘤细胞抑制作用及其机制研究[D];苏州大学;2014年

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本文编号：644297