荧光假单胞菌超氧化物歧化酶基因的克

发布时间：2024-02-15 02:05

　　超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)是一类生物体内广泛存在的抗氧化酶,其生物学功能是清除生物体内因自身有氧代谢所产生的超氧自由基,从而保护细胞免受自由基的破坏。SOD可以特异性催化超氧阴离子产生歧化反应,将O₂^-催化歧化为H₂O₂和O₂。荧光假单胞菌GcM5-1A是松材线虫携带的一种伴生细菌,已有研究表明该细菌在松萎蔫病的病理进程中与松材线虫发挥着协同作用。本研究利用PCR技术,从荧光假单胞菌GcM5-1A的基因组中克隆了编码SOD的完整开放阅读框(ORF),序列分析结果表明,该ORF全长654 bp,编码217个氨基酸。将SOD基因与表达载体pET-15b连接,构建pET-15b-SOD重组表达载体。将重组表达载体pE-15b-SOD转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了工程菌株。扩大培养后的工程菌通过IPTG诱导表达,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析可知,重组SOD在大肠杆菌BL21中表现出了较高的表达效率,相对分子量约为28 kDa,主要以包涵...

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1荧光假单胞菌SOD基因的PCR扩增M：DNAMarker15001：PCR扩增的目的片段

由琼脂糖凝胶电泳结果可知，该基因全长约660bp左右（如图1.1所示）。将PCR扩增产物进行胶回收，再经琼脂糖凝胶电泳检测回收片段大小及质量后，构建T-SOD载体。图1.1荧光假单胞菌SOD基因的PCR扩增M：DNAMarker15001：PCR扩....

图1.3测序结果及编码氨基酸序列12

图1.2T-SOD双酶切验证M：Marker5000；1：T-SOD/NdeI，XhoI体送北京睿博兴科科技有限公司进行测序，BL示，获得编码SOD的目的基因片段，长度为651.3）。

图1.4SOD序列blastx分析结果

blastx分析结果表明，该片段属于荧光假单胞菌含铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD）家族有较高的氨基酸序列同图1.4SOD序列blastx分析结果图1.5SOD序列blastx分析结果分子量大小为Mw:该片段属于荧光假单胞菌有较高的氨基酸序列同

图1.5SOD序列blastx分析结果13

blastx分析结果图1.5SOD序列blastx分析结果分子量大小为Mw:该片段属于荧光假单胞菌有较高的氨基酸序列同

本文编号：3899008