利用基因编辑技术降低酿酒酵母细胞壁稳定性的研究

发布时间：2024-06-15 01:23

　　酿酒酵母不仅细胞内富含各种活性物质,而且其本身也可以作为工程菌产生活性物质。但是酵母具有很厚的细胞壁,细胞内的这些活性物质都被其包围着,为了更好地利用细胞内的这些物质资源,研究有效的破壁方法特别重要。关于破碎酵母的细胞壁的方法多集中于化学、物理和生物破壁等,但是它们都存在各种各样的缺点,如化学破壁不仅会使营养物质的结构受到破坏,同时还会对环境产生恶劣的影响;物理破壁时会产生很大的噪声污染;生物破壁时所需费用相对较高,而且单一使用呈现的结果并不是很好。目前,利用CRISPR/Cas9系统对酵母的基因进行编辑取得了非常显著的成果,可以用于酵母基因组的单个或多个基因的突变以及染色体的大片段缺失和基因插入等。因此,在本实验中,采用CRISPR/Cas9系统,探究目的基因在特定条件下对酵母细胞壁稳定性的影响。本实验对酿酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因进行编辑,取得了如下结果:1.利用CRISPR/Cas9系统对酿酒酵母2.558菌株基因组中的SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因进行叠加编辑,获得突变株2.558-IV。2.探究温度对酿酒酵母突变株2.558-IV细胞壁稳定性...

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【部分图文】：

图2-1以2.558为出发菌进行SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因编辑的路线图

第二章酿酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4多基因编辑11表2-4所用引物及其序列（续）Table2-4Primersandsequences引物名称序列(5`-3`)ROM2RTTGGGAGTAGCATCAGTGGSIT4FCAATAAAGAAATGCCAGGCGSIT....

图2-2gRNA与Cas9共表达质粒构建电泳图

河北大学硕士学位论文222.3实验结果与分析2.3.1SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表达质粒的正确构建分别将SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA敲除组件和pCRCTG418载体用BsaI进行酶切，酶切产物经过回收后，再以一定的比例....

图2-3转化子扩增电泳图

第二章酿酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4多基因编辑23都可以转化酿酒酵母。2.3.3阳性转化子的选择分别进行SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表达质粒的转化，对平板上长出的菌落和出发菌分别用plnyzF/R引物进行扩增验证，出发菌没有12....

图2-5SNF1基因部分序列（突变部位）比对图

河北大学硕士学位论文24泳检测结果如图2-4所示，产物大小都与预期相符。序列比对如图2-5、2-6、2-7、2-8所示。12M535bp614bp560bp34M图2-4单基因突变株扩增电泳图Figure2-4Amplificationelectrophoretogramofth....

本文编号：3994709