过表达pyrP基因与NupC基因对大肠杆菌发酵分泌胞苷的影响

发布时间：2024-06-16 07:38

　　胞嘧啶核苷,也称为胞苷,是核苷类保健食品与药物重要的原料,市场需求量很大。胞苷主要通过微生物发酵方法获得,但现有菌株的胞苷发酵水平不高,受到多种因素影响。优化菌株细胞内胞苷的合成代谢方式及提高胞苷分泌效率是提高发酵单位的主要途径。胞苷可能是通过多种转运方式进行跨膜转运的,尿嘧啶通透酶(pyrP,EC3.1.3.104,由pyrP基因编码,分子量48KDa)和核苷转运蛋白(NupC,EC2.3.1.256,由NupC基因编码,分子量43 KDa)可能与胞苷分泌过程有关。本研究通过构建尿嘧啶通透酶和核苷转运蛋白NupC过表达体系,分析这两个基因的过表达对菌体细胞生长与胞苷发酵的影响,研究尿嘧啶通透酶和核苷转运蛋白在胞苷分泌过程的作用,从而不断提高菌体发酵胞苷的产率。具体研究内容如下:1、异源pyP基因过表达载体构建及其对胞苷发酵的影响。从解淀粉芽孢杆菌BG-09基因组DNA上PCR扩增pyrP基因,并与pSTV28载体进行连接构建质粒载体pSTV28-pyrP。采用化学转化法将其转入Escherichia coliBG-08中,得到重组菌E.coliBG-08P。使用0.5 mmol/L ...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２胞苷在大肠杆菌中的生物合成途径［７］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｏｆ?Ｃｙｔｉｄｉｎｅ?ｉｎ?Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏｌｉ??

尿嘧啶通透酶（；７＞ｒＰ，?ＥＣ?３．１．３．１０４，由砂ｒＰ基因编码，分子量４８ＫＤａ），解淀粉芽孢??杆菌中尿嘧啶通透酶基因位于嘧啶操纵子的前端，尿嘧啶通透酶和嘧啶的转运关系密??切，添加其表达剂量将在胞嘧啶的合成中起重要作用。操纵子含有１０个基因，如图１－３所??不，ｐｙｒ....

图２－１４胞苷标准品高效液相色谱图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１４?ＨＰＬＣ?ｏｆＣｙｔｉｄｉｎｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ??

２．２．９?ｐＳＴＶ２８质粒的提取??挑取单克隆提取质粒，使用ＴＩＡＮＧＥＮ质粒小提试剂盒（ＤＰ１０３）试剂盒法提取ｐＳＴＶ２８??质粒，提取步骤如图２－１２。使用前先在漂洗液ＰＷ中加入无水乙醇，将５００?ｍＬ平衡液ＢＬ??加入吸附柱ＣＰ３中（吸附柱放入收集管中），以１２０００?....

图2-15胞普高效液相色谱圈

Ｆｉｇｕｒｅ?２－１５?ＨＰＬＣ?ｏｆ?Ｃｙｔｉｄｉｎｅ??ａ：对照菌；ｂ：重组菌??实验结果??大肠杆菌五．ｃｏ＂?ＢＧ－０８生长曲线??０．９?－??０．８?？??０．７?？?３＾．?＾?＾??０．６??〇?０．５?／??§〇．?■?／??０３?－?广??０．２?／??０１?....

图２－１６￡．ａ？＂ＢＧ－０８生长曲线??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１６?Ｇｒｏｗｔｈ?Ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?Ｅ．ｃｏｌｉ?ＢＧ－０８??－．－

?１０．０??ａｉｃ??图２－１５胞苷高效液相色谱图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１５?ＨＰＬＣ?ｏｆ?Ｃｙｔｉｄｉｎｅ??ａ：对照菌；ｂ：重组菌??２．３实验结果??２．３．１大肠杆菌五．ｃｏ＂?ＢＧ－０８生长曲线??０．９?－??０．８?？??０．７?？?３＾．?＾?＾??０．６??....

本文编号：3995089