花色苷单体中压快速分离制备及其抑制荧光糖基化终产物构效关系及机理研究

发布时间：2024-02-19 09:09

　　近年来,花色苷的生物活性引起了越来越多的关注。然而,目前常用分离纯化花色苷的方法多存在耗时长、效率低、成本高、短时间内难以获得大量高纯度花色苷单体等弊端,具有较大的局限性。与此同时,随着对糖基化终产物(AGEs)的研究发现,AGEs的积累与糖尿病、阿兹海默综合征及衰老有很大的关系,目前医学研究使用的AGEs抑制剂如氨基胍、阿司匹林等对人体均可产生一定的毒副作用,因此,天然提取物对AGEs的抑制作用受到越来越多的关注。基于上述问题,本文建立不同结构花色苷快速分离纯化的方法,并通过建立不同糖基化阶段模拟体系,探究不同结构花色苷抑制荧光AGEs的构效关系及抑制机制。主要研究结果如下:(1)中压快速分离系统制备不同花色苷单体建立了桑葚、红树莓、草莓、玫瑰茄以及黑枸杞5种原料中压快速分离制备不同结构花色苷方法。制备柱为flash C18(80 g,25～35μm,100A),A流动相:2%甲酸水,B流动相:甲醇,进样量300 mg,桑葚和红树莓花色苷粗提物洗脱程序:0～2min,20%B;2～22 min;20%～30%B;22～32min,30%～40%B;草莓及玫瑰茄花色苷粗提物洗脱程序:0...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
第一章 绪论
    1 花色苷简介
        1.1 花色苷的结构
        1.2 花色苷的来源及分布
    2 花色苷的分离纯化国内外研究进展
        2.1 高速逆流色谱
        2.2 半制备高效液相色谱
        2.3 凝胶柱层析法
    3 植物多酚抑制糖基化终产物(AGEs)的研究概况
        3.1 食品中糖基化终产物产生的途径
        3.2 植物多酚抑制AGEs的国内外研究概况
            3.2.1 酚酸
            3.2.2 芪类
            2.2.3 类黄酮
        3.3 植物多酚抑制糖基化反应途径
            3.3.1 减少糖基化过程产生的自由基
            3.3.2 螯合金属离子
            3.3.3 清除羰基化合物
            3.3.4 保护蛋白质结构
    4 本论文研究目的意义及主要内容
        4.1 研究目的及意义
        4.2 主要研究内容
第二章 不同结构花色苷单体中压快速分离制备方法的建立
    1 材料与方法
        1.1 实验材料和仪器设备
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 仪器设备
        1.2 实验方法
            1.2.1 5种花色苷粗提物的提取
            1.2.2 5种花色苷粗提物HPLC检测分析
            1.2.3 5种花色苷粗提物MPRSS条件的优化
            1.2.4 所得级分纯度测定
            1.2.5 UPLC-MS对所得花色苷级分进行结构鉴定
            1.2.6 半制备型高效液相色谱制备6种不同花色苷单体及纯度检测
    2 结果与分析
        2.1 5种花色苷粗提物花色苷含量的检测
            2.1.1 桑葚花色苷粗提物花色苷含量的检测
            2.1.2 红树莓花色苷粗提物花色苷含量的检测
            2.1.3 草莓花色苷粗提物花色苷含量的检测
            2.1.4 玫瑰茄花色苷粗提物花色苷含量的检测
            2.1.5 黑枸杞花色苷粗提物花色苷含量的检测
        2.2 MPRSS分离纯化5种花色苷粗提物最优条件确定
            2.2.1 5种花色苷粗提物最佳洗脱条件的验证
        2.3 所得级分的HPLC分析及质谱结果鉴定
            2.3.1 所得级分的HPLC分析
            2.3.2 所得级分质谱结果鉴定
    3 讨论
    4 小结
第三章 花色苷抑制葡萄糖-β-Lg模拟体系荧光AGEs构效关系及机理研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料和仪器设备
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 葡萄糖-β-Lg模拟体系的建立
            1.2.2 荧光AGEs的测定
            1.2.3 葡萄糖含量的测定
            1.2.4 游离Lys含量的测定
            1.2.5 游离Arg含量的测定
            1.2.6 二酪氨酸、N-甲酰基犬尿氨酸的测定
            1.2.7 GO、MGO含量的测定
            1.2.8 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析
            1.2.9 CML的测定
            1.2.10 分子对接
        1.3 统计分析
    2 结果与分析
        2.1 不同结构花色苷抑制葡萄糖-β-Lg体系荧光AGEs的 IC₅₀值
        2.2 5种花色苷对早期羰胺反应的抑制作用
            2.2.1 5种花色苷对葡萄糖-β-Lg模拟体系葡萄糖含量的影响
            2.2.2 5种花色苷对葡萄糖-β-Lg模拟体系游离Lys、Arg含量的影响..
        2.3 5 种花色苷对二酪氨酸、N-甲酰基犬尿氨酸的抑制作用
        2.4 5 种花色苷对葡萄糖-β-Lg体系中GO、MGO含量的影响
        2.5 SDS-PAGE分析
        2.6 5 种不同结构花色苷对葡萄糖-β-Lg体系CML的抑制作用
        2.7 分子对接
    3 讨论
    4 小结
第四章 花色苷抑制GO-β-Lg及 MGO-β-Lg模拟体系荧光AGEs构效关系及机理研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料和仪器设备
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 GO-β-Lg及 MGO-β-Lg模拟体系的建立
            1.2.2 荧光AGEs的测定
            1.2.3 游离Lys含量的测定
            1.2.4 游离Arg含量的测定
            1.2.5 GO含量的测定
            1.2.6 MGO含量的测定
            1.2.7 二酪氨酸、N-甲酰基犬尿氨酸的测定
            1.2.8 5 种花色苷对GO、MGO的清除机理探究
            1.2.9 蛋白质羰基含量的测定
            1.2.10 蛋白质巯基含量的测定
            1.2.11 SDS-PAGE分析
            1.2.12 CML的测定
        1.3 统计分析
    2 结果与分析
        2.1 7 种不同花色苷抑制GO-β-Lg及 MGO-β-Lg模拟体系荧光AGEs的IC₅₀值
            2.1.1 7 种不同花色苷抑制GO-β-Lg模拟体系荧光AGEs的 IC₅₀值
            2.1.2 7 种不同花色苷抑制MGO-β-Lg模拟体系荧光AGEs的 IC₅₀值
        2.2 5 种花色苷对GO-β-Lg及 MGO-β-Lg体系游离Lys、Arg含量的影响
            2.2.1 5 种花色苷对GO-β-Lg体系游离Lys、Arg含量的影响
            2.2.2 5 种花色苷对MGO-β-Lg体系游离Lys、Arg含量的影响
        2.3 5 种花色苷对GO-β-Lg模拟体系GO含量的影响
        2.4 5 种花色苷对MGO-β-Lg模拟体系MGO含量的影响
        2.5 5 种花色苷对GO-β-Lg及 MGO-β-Lg模拟体系二酪氨酸、N-甲酰基犬尿氨酸的抑制作用
            2.5.1 5 种花色苷对GO-β-Lg体系二酪氨酸、N-甲酰基犬尿氨酸的抑制作用
            2.5.2 5 种花色苷对MGO-β-Lg体系二酪氨酸、N-甲酰基犬尿氨酸的抑制作用
        2.6 5 种花色苷对GO、MGO的清除机理探究
            2.6.1 5 种花色苷对GO、MGO的清除作用
            2.6.2 5 种花色苷与GO加合物的分析
            2.6.3 5 种花色苷与MGO加合物的分析
        2.7 5 种花色苷对GO-β-Lg及 MGO-β-Lg模拟体系蛋白质结构的影响
            2.7.1 5 种花色苷GO-β-Lg及 MGO-β-Lg模拟体系蛋白质羰基含量的影响
            2.7.2 5 种花色苷对GO-β-Lg及 MGO-β-Lg体系蛋白质巯基含量的影响
            2.7.3 SDS-PAGE分析
        2.8 5 种花色苷对GO-β-Lg模拟体系中CML的抑制作用
    3 讨论
    4 结论
第五章 结论与展望
    1 结论
        1.1 不同花色苷单体中压快速制备方法的建立
        1.2 不同结构花色苷抑制葡萄糖-β-Lg模拟体系荧光AGEs构效关系及机理研究
        1.3 不同结构花色苷抑制GO-β-Lg及 MGO-β-Lg模拟体系荧光AGEs构效关系及机理研究
    2 展望
参考文献
在读期间发表的论文
致谢



本文编号：3902449