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牙表皮来源的Wnt配体对牙齿分化的影响

发布时间:2020-04-27 07:39
【摘要】:不同的Wnt配体在牙齿发育过程中的上皮以及间充质具有不同的时空表达,然而,这些差异表达的Wnt配体在牙齿发育中的作用在之前的研究中并不明确。Wntless(Wls)功能的缺失会导致Wnt配体无法运输到细胞外,因而Wls的条件性敲除小鼠近年来已经成为研究Wnt配体功能的重要工具。在牙齿发育过程中,Shh特异性的在牙源性上皮特异性表达,为了研究在牙齿上皮特异性表达的Wnt配体的功能,在本研究中,我们使用Shh-Cre来敲除牙齿上皮表达的Wls来进行研究。我们发现,使用Shh-Cre对Wls进行条件性敲除WlsShh-Cre会导致牙齿分化缺陷,具体表现在成釉细胞和成牙本质细胞的极性缺失,并缺乏分化标志物(Dspp,Osterxi,Decorin,Colla1)的表达,同时伴随着牙本质含量的显著降低。我们进一步使用Wnt信号通路的报告基因小鼠BAT-GAL小鼠来研究Wls敲除对经典Wnt信号通路的影响,发现在E16.5 WlsShh-Cre小鼠牙齿中,Wnt信号通路活性在第二釉结明显下调,此外Wnt信号通路的靶基因Lef1,Axin2和Dkk1的表达显著下调。以上结果就提示,WlsShh-Cre突变牙齿中的经典的wnt信号通路活性下调。此外,我们发现Shh信号通路分子Shh,Ptc 和Gli1在E16.5的牙齿中的表达也显著下调。我们还发现,在E16.5天,Wls突变牙齿的上皮和间充质中细胞增殖发生异常;然而细胞凋亡并没有受到影响。通过染色质免疫沉淀实验我们发现成牙本质细胞分化的关键标志物Decorin和Colla1在牙齿发育过程中是Wnt信号通路的靶基因,它们在WlsShh-Cre牙齿中下调。此外,体外组织培养实验也发现,经使用LiCl诱导Wnt信号通路活性可以导致Decorin和Colla1的表达在Wls突变牙齿中显著增加。综上所述,我们的研究结果表明,牙表皮来源的Wnt配体对牙齿分化有重要的调控作用。
【图文】:

照片,牙齿发育,细胞系,小鼠


悘__1:::\l逡逑灥口孭_逡逑图1邋Wls介导的Wnt在小鼠牙齿发育SHH细胞系中影响。(图1,A-C,逡逑A’-C’):通过用组织学分析结果显示,W//"A—D'*E14.5可以正常发展到帽逡逑状期CAP阶段,但是突变体要比对照组牙齿显示的小。在E17.5天(图1,逡逑B,B’;邋C,C’)和pO处的磨牙(图1,D.D’)Masson三色染色显、示圫逡逑与对照组相比较尺寸变小,小鼠牙本质基质(箭头方向)减少。E,逡逑E’;邋F,,邋F’:显示了邋C,邋C’,D,D’方框内区域的高倍放大率照片。比例尺:逡逑B-D,邋BLD,,200pm;E,F,邋E,,F,,邋50叫1;其他的是邋100叫1。逡逑26逡逑

原位杂交,成釉细胞,方法分析,基因表达


逡逑图2.1原位杂交结果显示在圫-?中(图2.1,A-F,A’-F’)逡逑Amelogenin、Dspp、Coiled、Osterix、Decorin,Nestin邋表达量飞悔..a邋am,逡逑是成釉细胞;od,是成牙细胞。逡逑c逡逑.0邋A邋A邋逦逡逑</>邋1逦W邋Conlrol逡逑¥邋1邋2逦m邋Wfs^11^'9逡逑llU.Uil?lil逡逑Z邋_1。垆妒邋DspP逦C0'1?A邋0ste^邋0ec0^邋^逡逑图2.2邋Q-PCR方法分析对照组和W//Wi_c>e小鼠在鼠p0时A;批/oge?/n、逡逑Ds/7/?、C<7Wa_/、(7你r/x、Decora邋amiiVest/n邋这几个基因表达均降低。逡逑女邋P<0.05。逡逑28逡逑
【学位授予单位】:杭州师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:Q95-33

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1 韩波;杨U

本文编号:2642029


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