日本七鳃鳗NICIR受体克隆表达、抗体制备及相关免疫学研究

发布时间：2022-10-08 20:04

　　在高等脊椎动物中,有体液免疫和细胞免疫两种免疫途径,分别由B细胞和T细胞介导。B细胞受体（BCR）复合物CD79a/b上存在免疫受体酪氨酸激活基序（ITAM）,ITAMS基序上的酪氨酸残基瞬时磷酸化,可以产生临时结合位点以激活胞内信号分子,实现BCR的跨膜信号转导。在无颌类脊椎动物尽管没有以TCR、BCR及MHC主导的适应性免疫系统,但被发现通过新型可变淋巴细胞受体（variable lymphocyte receptor,VLR）形成了另一种类型的适应性免疫系统,能够产生免疫系统所需的多样性丰富的抗原识别受体分子。但VLR受体如何实现跨膜信号转导的分子机制尚未见报道。本研究首次在日本七鳃鳗中发现了一类新型含ITAM免疫球蛋白超家族受体（novel ITAM-containing immunogloblin superfamily receptors,NICIR）,并对其进行分子克隆得到完整的开放阅读框（ORF）,命名为Lja-NICIR。Lja-NICIR的ORF全长为864 bp,编码含有267个氨基酸残基的蛋白质。对LjaNICIR酶切位点进行分析,与表达载体pET-32a（+）... 

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 免疫受体酪氨酸激活基序
    1.2 BCR信号转导途径
        1.2.1 BCR信号转导中Syk激酶的作用
        1.2.2 BCR信号转导中Lyn的主要作用
        1.2.3 BCR信号转导的不同结果
    1.3 TCR信号转导途径
        1.3.1 TCR信号转导中LCK信号通路
        1.3.2 TCR信号转导中PI3K信号通路
    1.4 七鳃鳗适应性免疫系统
第2章 七鳃鳗Lja-NICIR分子克隆及生物信息学分析
    2.1 材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂与药品
        2.1.3 实验仪器
    2.2 七鳃鳗Lja-NICIR分子克隆方法
    2.3 结果
    2.4 日本七鳃鳗Lja-NICIR生物信息学分析
        2.4.1 一级结构分析
        2.4.2 功能结构域预测
        2.4.3 二级结构预测
    2.5 讨论
    2.6 小结
第3章 七鳃鳗Lja-NICIR分子原核重组表达与蛋白质纯化
    3.1 材料
        3.1.1 实验试剂与药品
        3.1.2 实验仪器
    3.2 方法
        3.2.1 目的基因Lja-NICIR与表达载体p ET-32a(+)双酶切
        3.2.2 目的基因Lja-NICIR与表达载体p ET-32a(+)琼脂糖胶回收
        3.2.3 目的基因Lja-NICIR与表达载体p ET-32a(+)连接与转化
        3.2.4 目的基因Lja-NICIR与表达载体p ET-32a(+)重组表达菌的筛选
        3.2.5 重组蛋白质的诱导
        3.2.6 重组蛋白质的纯化
        3.2.7 重组蛋白质浓度的测定及 His 标签检测
    3.3 结果
        3.3.1 目的基因Lja-NICIR与表达载体p ET-32a(+)连接
        3.3.2 Lja-NICIR重组蛋白质的诱导
        3.3.3 Lja-NICIR重组蛋白质浓度的测定
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 七鳃鳗Lja-NICIR多克隆抗体制备及其鉴定
    4.1 材料
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验试剂与药品
        4.1.3 实验仪器
    4.2 方法
        4.2.1 免疫方法
        4.2.2 ELISA检测抗体效价
        4.2.3 Lja-NICIR多克隆抗体纯化
        4.2.4 重组蛋白多克隆抗体浓度的测定
        4.2.5 重组蛋白多克隆抗体特异性检测
    4.3 结果
        4.3.1 Lja-NICIR多克隆抗体效价检测
        4.3.2 Lja-NICIR多克隆抗体浓度测定
        4.3.3 Lja-NICIR重组蛋白多克隆抗体特异性检测
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 七鳃鳗Lja-NICI基因相关免疫功能研究
    5.1 材料
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验试剂与药品
        5.1.3 实验仪器
    5.2 方法
        5.2.1 日本七鳃鳗免疫方法
        5.2.2 日本七鳃鳗的白细胞（淋巴细胞）及鳃髓样小体的提取
        5.2.3 Lja-NICIR基因相关免疫功能研究
    5.3 实验结果
        5.3.1 Lja-NICIR基因si RNA的敲低效果检测
        5.3.2 在LPS和PHA免疫下Lja-NICIR基因的检测
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
本论文创新点
参考 文献
附录A Pet32a（+）质粒图谱
攻读硕士学位期间发表学士论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Lamprey: a model for vertebrate evolutionary research[J]. Yang XU,Si-Wei ZHU,Qing-Wei LI.  动物学研究. 2016(05)



本文编号：3688344