Mito-CRISPR/Cas9系统的构建及线粒体靶向递送功能验证

发布时间：2024-05-21 19:12

　　线粒体是细胞有氧能量代谢的重要器官,线粒体研究对动物高原适应性、低氧胁迫耐受性具有重要意义;越来越多的疾病被发现是线粒体基因组发生突变造成的。因此,线粒体基因组编辑逐渐成为了科学家们的研究热点。随着CRISPR/Cas9技术的迅速发展和完善,鉴于锌指核酸酶(Zinc-Finger Nucleases,ZFNs)、TALE核酸酶(Transcription Activator-Like Effector Nucleases,TALENs)等核酸酶技术在哺乳动物线粒体基因组编辑方面的成功应用,人们开始尝试改造CRISPR/Cas9系统进行线粒体基因组编辑。CRISPR/Cas9系统主要是利用Cas9核酸酶与单链导向RNA(sg RNA)复合物,通过更有效地诱导基因组DNA中特定位点的双链断裂,进而实现高效的基因组编辑。对于线粒体基因组DNA(mt DNA)来说,其双链断裂的修复机制尚不明确,细胞会在清除断裂mt DNA的同时增加其拷贝数至正常水平。另外,RNA进入线粒体的机制亦不明确,利用CRISPR/Cas9系统进行mt DNA编辑时,sg RNA的线粒体靶向递送尚存在困难。本研究针对哺...

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【部分图文】：

图1-1锌指核酸酶识别靶序列示意图(Urnov,FDetal.2010)

西北农林科技大学硕士学位论文2图1-1锌指核酸酶识别靶序列示意图(Urnov,FDetal.2010)Fig.1-1Sketchofazincfingernuclease(ZFN)dimerbindingtoitstarget(Urnov,FDetal.2010)2001年，Bi....

图1-2TALE核酸酶识别靶序列示意图(Nemudryi,AAetal.2014)

第一章文献综述3结合域进行改造，开发特异性的人工TALE核酸内切酶，并成功实现了对酵母基因组DNA的靶向切割(Christian,Metal.2010)。图1-2TALE核酸酶识别靶序列示意图(Nemudryi,AAetal.2014)Fig.1-2TALENucleaseIde....

图1-3CRISPR/Cas系统的结构

西北农林科技大学硕士学位论文4图1-3CRISPR/Cas系统的结构Fig.1-3StructureoftheCRISPR/CassystemCRISPR/Cas系统根据Cas蛋白的不同分为3类，分别为I型、II型和III型。现在人们常用的来自于嗜热链球菌的CRISPR/Cas9....

图1-4双RNA和单链RNA介导的CRISP

西北农林科技大学硕士学位论文4图1-3CRISPR/Cas系统的结构Fig.1-3StructureoftheCRISPR/CassystemCRISPR/Cas系统根据Cas蛋白的不同分为3类，分别为I型、II型和III型。现在人们常用的来自于嗜热链球菌的CRISPR/Cas9....

本文编号：3979805