量子点荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱检测番茄酱中罗丹明B的研究
发布时间：2021-10-27 03:04
目的:本研究根据抗原-抗体特异性识别反应和荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer,FRET）的原理,构建一种基于量子点（Quantum dots,QDs）的新型荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱检测番茄酱中罗丹明B（Rhodamine B,RB）残留。方法:通过罗丹明B的单克隆抗体与溴化氢活化琼脂糖凝胶-4B偶联制备分析物抗体胶,设计单检测层的凝胶检测柱。基于抗原抗体的特异性结合反应,并利用罗丹明B和量子点之间的静电引力作用,构建一种新型的荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱。通过优化抗体添加量、量子点稀释倍数、孵育时间以及上样量等参数,最终实现番茄酱样品中罗丹明B的快速灵敏检测。结果:当1.0 g溴化氢活化的琼脂糖凝胶添加2.0 mg罗丹明B单克隆抗体,量子点溶液稀释3000倍,孵育时间控制在50 s,罗丹明B上样量为3.0 mL,该荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱针对罗丹明B的方法检测限（limit of detection,LOD）能够达到最小值1.0μg/L。样品分析结果表明,该方法针对番茄酱样品中罗丹明B的检测限为5.0μg/kg,并且与HPL...
【文章来源】：食品工业科技. 2020,41(20)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
罗丹明B荧光猝灭免疫
本研究基于抗原抗体特异性结合反应和荧光共振能量转移的原理,建立了一种针对番茄酱中非法着色剂罗丹明B进行快速检测的荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱方法,其原理如图1所示。首先将特异性识别罗丹明B的单克隆抗体与溴化氢活化琼脂糖凝胶-4B偶联制备检测柱的检测层。当加入含有罗丹明B样品时,罗丹明B就被抗体特异性的吸附到检测层。再向体系中加入适量的羧基化ZnCdSe/ZnS量子点,这时由于量子点表面富含羧基,羧基为阴离子,带有负电荷,罗丹明B是带有正电荷的杂环碱性染料,两者之间能够通过静电引力的相互作用紧密结合在一起,满足荧光共振能量转移的对距离的要求。同时ZnCdSe/ZnS量子点的最大荧光发射波长(532 nm)与罗丹明B最大吸收波长(554 nm)发生重叠,能够满足荧光共振能量转移的光谱重叠的要求。这时量子点与罗丹明B发生荧光共振能量转移,出现量子点(绿色荧光)荧光猝灭而罗丹明B荧光(红色荧光)增强的现象。样品中罗丹明B含量越多,与抗体特异性结合越多,在检测层中与量子点溶液发生荧光猝灭越明显,检测层观察到的量子点(绿色荧光)荧光猝灭而罗丹明B荧光(红色荧光)增强现象越明显。本研究根据检测层中荧光亮度变化为本实验的检测指标,当检测层中的绿色荧光发生明显变化,此时对应的浓度确立为罗丹明B的检测限。2.2 量子点荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱条件优化
在制备分析物抗体胶的过程中,抗体添加量过少或过多,抗原抗体的特异性结合会受到影响,结合到分析胶上的抗体越多,检测层富集分析物的能力越强,因此在相同荧光强度下方法的灵敏度也就越高。然而,抗体添加量过多,不仅会导致实验成本的提高,而且过多的抗体会导致凝胶上抗体蛋白分布不均或自聚集影响实验结果的稳定性。因此,分析物抗体胶制备过程中抗体添加量是非常重要的因素。分别取不同量的罗丹明B单克隆抗体(0、1.0、2.0和3.0 mg)与固定量1.0 g的溴化氢活化的琼脂糖凝胶发生偶联反应制备检测层,固定罗丹明B添加浓度(3.0 μg/L)、上样体积(1.0 mL)以及量子点浓度(稀释3000倍)等其他条件,按上述实验方法进行样品操作,在紫外分析仪365 nm的UV光照下,选择导致荧光强度明显变化的最小抗体添加量作为抗体胶中最佳抗体量。结果如图2所示,2.0 mg罗丹明B单克隆抗体与1.0 g的琼脂糖凝胶结合,检测层中的绿色荧光完全消失,荧光淬灭现象明显。因此,选择2.0 mg罗丹明B单克隆抗体(每1.0 g溴化氢活化的琼脂糖凝胶)为分析物抗体胶中抗体量的最优值。2.2.2 量子点稀释倍数的确定
【参考文献】：
期刊论文
[1]量子点标记免疫亲和凝胶柱快速检测动物组织中恩诺沙星[J]. 李诗洁,生威,王俊平,刘越,张燕,王硕. 中国食品学报. 2018(10)
[2]食品中罗丹明B快速检测方法的建立与实现[J]. 阮成旭,陈梅兰,王晓丽,彭善杰,林钦,李昊. 中国食品学报. 2015(06)
[3]高效液相色谱法测定辣椒粉中罗丹明B的测量不确定度评估[J]. 牛华,牛之瑞,冯雷,鲁燕骅,马雪涛,谭建林,张学忠,俸金梅. 食品科学. 2014(08)
[4]超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产调味品中的罗丹明B、结晶紫和孔雀石绿[J]. 张贞理,张平,申大忠. 分析化学. 2012(03)
[5]腊肠中罗丹明B的高效液相色谱串联质谱检测方法[J]. 程慧,李兵,占春瑞. 食品科学. 2010(04)
博士论文
[1]食品安全分析中快速质谱方法及应用研究[D]. 杨子辉.湖南师范大学 2019
硕士论文
[1]孔雀石绿和结晶紫的免疫检测新方法研究[D]. 陈义元.天津科技大学 2018
本文编号：3460740
【文章来源】：食品工业科技. 2020,41(20)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
罗丹明B荧光猝灭免疫
本研究基于抗原抗体特异性结合反应和荧光共振能量转移的原理,建立了一种针对番茄酱中非法着色剂罗丹明B进行快速检测的荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱方法,其原理如图1所示。首先将特异性识别罗丹明B的单克隆抗体与溴化氢活化琼脂糖凝胶-4B偶联制备检测柱的检测层。当加入含有罗丹明B样品时,罗丹明B就被抗体特异性的吸附到检测层。再向体系中加入适量的羧基化ZnCdSe/ZnS量子点,这时由于量子点表面富含羧基,羧基为阴离子,带有负电荷,罗丹明B是带有正电荷的杂环碱性染料,两者之间能够通过静电引力的相互作用紧密结合在一起,满足荧光共振能量转移的对距离的要求。同时ZnCdSe/ZnS量子点的最大荧光发射波长(532 nm)与罗丹明B最大吸收波长(554 nm)发生重叠,能够满足荧光共振能量转移的光谱重叠的要求。这时量子点与罗丹明B发生荧光共振能量转移,出现量子点(绿色荧光)荧光猝灭而罗丹明B荧光(红色荧光)增强的现象。样品中罗丹明B含量越多,与抗体特异性结合越多,在检测层中与量子点溶液发生荧光猝灭越明显,检测层观察到的量子点(绿色荧光)荧光猝灭而罗丹明B荧光(红色荧光)增强现象越明显。本研究根据检测层中荧光亮度变化为本实验的检测指标,当检测层中的绿色荧光发生明显变化,此时对应的浓度确立为罗丹明B的检测限。2.2 量子点荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱条件优化
在制备分析物抗体胶的过程中,抗体添加量过少或过多,抗原抗体的特异性结合会受到影响,结合到分析胶上的抗体越多,检测层富集分析物的能力越强,因此在相同荧光强度下方法的灵敏度也就越高。然而,抗体添加量过多,不仅会导致实验成本的提高,而且过多的抗体会导致凝胶上抗体蛋白分布不均或自聚集影响实验结果的稳定性。因此,分析物抗体胶制备过程中抗体添加量是非常重要的因素。分别取不同量的罗丹明B单克隆抗体(0、1.0、2.0和3.0 mg)与固定量1.0 g的溴化氢活化的琼脂糖凝胶发生偶联反应制备检测层,固定罗丹明B添加浓度(3.0 μg/L)、上样体积(1.0 mL)以及量子点浓度(稀释3000倍)等其他条件,按上述实验方法进行样品操作,在紫外分析仪365 nm的UV光照下,选择导致荧光强度明显变化的最小抗体添加量作为抗体胶中最佳抗体量。结果如图2所示,2.0 mg罗丹明B单克隆抗体与1.0 g的琼脂糖凝胶结合,检测层中的绿色荧光完全消失,荧光淬灭现象明显。因此,选择2.0 mg罗丹明B单克隆抗体(每1.0 g溴化氢活化的琼脂糖凝胶)为分析物抗体胶中抗体量的最优值。2.2.2 量子点稀释倍数的确定
【参考文献】：
期刊论文
[1]量子点标记免疫亲和凝胶柱快速检测动物组织中恩诺沙星[J]. 李诗洁,生威,王俊平,刘越,张燕,王硕. 中国食品学报. 2018(10)
[2]食品中罗丹明B快速检测方法的建立与实现[J]. 阮成旭,陈梅兰,王晓丽,彭善杰,林钦,李昊. 中国食品学报. 2015(06)
[3]高效液相色谱法测定辣椒粉中罗丹明B的测量不确定度评估[J]. 牛华,牛之瑞,冯雷,鲁燕骅,马雪涛,谭建林,张学忠,俸金梅. 食品科学. 2014(08)
[4]超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产调味品中的罗丹明B、结晶紫和孔雀石绿[J]. 张贞理,张平,申大忠. 分析化学. 2012(03)
[5]腊肠中罗丹明B的高效液相色谱串联质谱检测方法[J]. 程慧,李兵,占春瑞. 食品科学. 2010(04)
博士论文
[1]食品安全分析中快速质谱方法及应用研究[D]. 杨子辉.湖南师范大学 2019
硕士论文
[1]孔雀石绿和结晶紫的免疫检测新方法研究[D]. 陈义元.天津科技大学 2018
本文编号：3460740
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