马鲛鱼抗氧化肽的纳流液相色谱法分离与筛选

发布时间：2021-11-22 05:41

　　在海洋天然产物中,马鲛鱼是一种重要的高活性抗氧化肽生物源,具有极高的加工附加值。由于鱼体组织的复杂性,活性抗氧化肽成分的提取和筛选对样品制备和分离技术提出了挑战。使用不同蛋白酶对鱼体组织进行酶解时,所获得的活性肽结构及功能活性会有显著的差别。为了获得高活性的抗氧化肽,该研究分别考察了风味蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶5种蛋白酶的酶解效果。以二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）、羟自由基（·OH）清除率和水解度（DH）为指标,筛选最优水解酶。结果表明,胰蛋白酶酶解液清除DPPH·和·OH能力最强,清除率分别达到88.93%±0.82%和53.09%±0.73%。在单因素试验的基础上,以DPPH·清除率为响应值,以加酶量、酶解温度和时间为函数,进行了三因素三水平响应面试验,获得水解度23.66%、DPPH·清除率93.78%以及·OH清除率62.59%的最优制备条件。纳流液相色谱具有低样品量、低溶剂消耗和高效等优势。为筛选出适合于马鲛鱼内脏抗氧化肽分离分析的固定相,该研究使用1∶1 000分流比的纳流液相平台,分别使用反相C18柱（15 cm×100μm, 5μm, 3... 

【文章来源】：色谱. 2020,38(12)北大核心CSCD

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【部分图文】：

加酶量和酶解温度对DPPH·清除率交互影响的响应面和等高线

加酶量和酶解时间对DPPH·清除率交互影响的响应面和等高线

图4显示了当加酶量位于中心点即0.4%时,酶解时间和酶解温度对DPPH·清除率的交互影响效应。由图4可以看出,在同一酶解温度下,DPPH·清除率随着酶解时间的增加而先增加后趋于平稳;在同一酶解时间下,DPPH·清除率随着酶解温度的升高而先升高后降低。说明在一定的酶解温度范围内,要达到较高的DPPH·清除率,适当地升高酶解温度可以缩短酶解所需的时间。根据Design Expert v8.0.6对模型进行优化,得出结果:加酶量0.368%、酶解温度40.55 ℃、酶解时间2.545 h。在此条件下,模型预测APS对DPPH·的清除率达到94.415%。考虑到实际试验时操作的可行性,调整工艺条件为:加酶量0.37%,酶解温度41 ℃,酶解时间2.5 h。重复3次试验,得到DPPH·清除率为93.78%±0.35%,与预测值相比,相对误差为0.67%,说明拟合模型优化出的条件较为准确。在此条件下,APS的水解度为23.66%, ·OH清除率为62.59%。

【参考文献】：
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本文编号：3511054