滚环扩增(RCA)技术放大信号实现17β-雌二醇(E2)的超灵敏检测

发布时间：2024-07-01 21:54

　　目的为实现食品中17β-雌二醇(E2)污染物的超灵敏检测,本研究将适配体、分子信标和滚环扩增(RCA)技术相结合,用于E2的荧光检测。方法 E2能解旋由适配体和cDNA杂交生成的复合DNA,使cDNA游离并与环DNA特异性结合,在Phi29酶的作用下生成长单链DNA。长单链DNA与分子信标杂交后,解旋分子信标的发夹结构,使FAM荧光基团的荧光恢复,从而实现E2的超灵敏检测。结果经过条件优化,在0.001ng/mL-10ng/mL的浓度范围内E2浓度与荧光强度呈现良好的线性关系:y=594.17LgC+3868.87(R²=0.9758),检出限为0.19 pg/mL。在牛奶和自来水中,加标回收率分别为81.33%-117.42%和89.25%-107.04%,相对标准偏差是2.02%-3.13%和1.09%-2.45%。结论在本研究中,我们基于适配体技术和等温扩增技术提出了一种E2的超灵敏荧光检测方法。该方法灵敏度高、特异性强、操作简单、实验仪器要求低。该策略为E2的检测提供了一种新的方法,也为其他污染物的检测提供了新的思路。

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 仪器和试剂
    1.2 环DNA的制备
    1.3 E2和cDNA竞争结合适配体
    1.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
    1.5 RCA产物解旋分子信标颈环结构
    1.6 E2检测方法
    1.7 实际样品中E2的检测
2 结果和讨论
    2.1 合成环DNA
    2.2 E2和cDNA竞争结合适配体验证
    2.3 RCA产物和分子信标结合效果
    2.4 实验条件优化
    2.5 荧光检测
    2.6 特异性实验
    2.7 加标回收实验和方法学比较
3 结论



本文编号：3999239