生物法制备宋内志贺菌多糖结合疫苗的研究

发布时间：2021-08-06 08:46

　　痢疾是由志贺菌引起的以发热、腹泻、血便和腹痛为主要症状的菌痢,具有高传染性、高发病率和高死亡率等严重危害,尤其是在5岁以下儿童中更为突出。痢疾主要由福氏志贺菌和宋内志贺菌引起,近年来我国宋内志贺菌感染率正不断攀升,耐药情况也日趋严峻。疫苗接种被认为是预防和控制传染病最经济有效的手段。细菌表面多糖（如O抗原多糖和荚膜多糖）能够激发机体产生保护性抗体,然而,多糖抗原不能产生长久的保护效果,并且大多对2岁以下儿童无效。将多糖连接到适当的底物蛋白制备成多糖结合疫苗,使其由T细胞非依赖抗原转变为T细胞依赖抗原,则弥补了多糖抗原用作疫苗的不足。多糖结合疫苗的发展和应用成就有目共睹,被称为最成功的疫苗之一。现有的多糖蛋白结合疫苗都是通过化学合成方法制备,存在多种缺陷。如今,除了化学合成法生产多糖蛋白结合疫苗外,还有一种新兴的方法——生物合成法。本研究通过应用生物合成法“一站式”制备宋内志贺菌多糖蛋白结合疫苗,并对其理化、生物学特性及保护性进行评价。首先我们利用基因工程手段敲除宋内菌S7株的O-抗原连接酶基因（waaL）构建S7 waaL表达菌株,之后将糖基化系统质粒(pET28a-PglL-CTB<... 

【文章来源】：中国食品药品检定研究院北京市

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

志贺菌入侵过程

硕士研究生学位论文·中国食品药品检定研究院·2015 级素 A（PEA)、霍乱毒素(CT)和霍乱毒素 B 亚单位(CTB)等等[33]，我国的结合疫苗大多是以 TT 为载体蛋白，国外常用的载体蛋白有 TT、DT、CRM197及 OMP 等[34]。随着多糖疫苗的不断发展，多糖结合疫苗的研究也不断推进。到 2011 年，15价肺炎多糖结合疫苗已经研制成功。多糖结合疫苗获得社会效益的同时也获得了巨大的经济效益。图 1.2 是多糖疫苗和多糖结合疫苗发展的历史时间表。

图 1.2 多糖疫苗和多糖结合疫苗及其发展历史时间表[35]3 宋内菌多糖抗原3.1 志贺菌常见抗原物质寻找合适的抗原，是研究良好疫苗的前提。从以往的研究来看，大部分细菌抗原一般倾向于膜蛋白和鞭毛蛋白。经过大量对志贺菌常见抗原的研究取得了一些成果：（1）脂多糖（LPS）/OPS：LPS 是革兰氏阴性细菌的内毒素，存在于细菌外膜由脂质 A、核心多糖和 OPS 三部分组成，如图 1.3 所示。OPS 是由多个糖单位重复串联而成，是血清分型依据之一。多项研究已经证明 OPS[20, 22]和 LPS[36, 37]是良好的抗原物质。（2）志贺菌外膜囊泡（OMVs）：OMVs 是志贺菌分泌的一种囊泡结构由 LPS、蛋白颗粒和核酸等物质构成[38, 39]。（3）Invaplex：是从志贺菌裂解液中通过水萃取和离子交换层析得到的含有 LPS 和 T3SS 蛋白的复合物[40, 41]。（4）OmpA是一个从福氏志贺菌中通过离子交换层析法纯化得到的 34 kDa

【参考文献】：
期刊论文
[1]多糖蛋白结合疫苗中载体蛋白的研究与应用[J]. 谭亚军,张庶民,侯启明.  中国疫苗和免疫. 2013(04)
[2]宋内志贺菌流行新趋势和耐药新特点[J]. 曲芬,毛远丽.  传染病信息. 2013(01)
[3]志贺氏菌病发病机制的研究进展[J]. 康静静,杨玉荣,梁宏德.  中国农业科学. 2011(09)
[4]宋内氏痢疾杆菌O-SP-TT结合疫苗的制备及其免疫学特性的研究[J]. 王燕,杜琳,田玉珍,谢贵林.  微生物学免疫学进展. 2002(02)
[5]结合疫苗概述[J]. 王燕,王秉瑞,谢贵林.  微生物学免疫学进展. 2000(01)
[6]细菌多糖-蛋白结合疫苗研究进展[J]. 张娜,张萍,肖詹蓉.  国际生物制品学杂志. 2011 (05)



本文编号：3325460