幽门螺杆菌BabA2/UreI融合基因减毒伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建与鉴定

发布时间：2024-06-28 05:15

　　背景与目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)的高感染率及其严重的危害性,使Hp疫苗成为当今研究的热点之一。随着疫苗研究的深入,应用混合抗原成分制备Hp疫苗将是未来Hp疫苗研究的趋势。细胞内感染性细菌减毒后作为DNA疫苗载体是目前基因疫苗研究的热点之一。沙门氏菌(Salmonella typhimurium)是一种较为常见的侵袭性胞内菌,通过基因工程方法减毒后对宿主致病性显著降低,但仍保留良好的侵袭力,可直接将表达质粒携带进入动物细胞内表达相应的蛋白而诱导特异性的免疫应答反应。但由于其质粒中含有抗生素抗性基因,尽管其在体外试验有效,在人体内却无法应用,Nakayama等构建的平衡致死系统解决了这一问题。本课题拟构建幽门螺杆菌BabA2/UreI融合基因双价DNA疫苗,首先通过基因工程技术构建含asd基因的重组原核表达质粒,并利用沙门氏菌asd平衡致死系统,最终获得表达重组人BabA2/UreI融合基因蛋白的重组沙门菌减毒疫苗株x8501(pYA3342/BabA2/UreI),并检测目的蛋白的表达和抗原性,为制备预防Hp感染的DNA疫苗奠定基础。 方法:①Ba...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1pYA3342的物理图谱

2.2.1.2质粒表达质粒pYA3342(asd+)由RoyCurtissIII博士惠赠，其物理图谱见图2已构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI由南昌大学第一附属医院化病研究所制备[27,28]，其物理图谱见图2.2；载体pC....

图2.2pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI的物理图谱

2.2.1.2质粒表达质粒pYA3342(asd+)由RoyCurtissIII博士惠赠，其物理图谱见图2已构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(-)/BabA2/UreI由南昌大学第一附属医院化病研究所制备[27,28]，其物理图谱见图2.2；载体pC....

图2.4重组质粒pYA3342lBabA2/tJreI构建示意图

图2.5PCR扩增BabA2/UreI融合基因

图2.5PCR扩增BabA2/UreI融合基因图2.6酶切pCF-T/BabA2/UreI融合质粒A：DNAMarkerA：DNAMarkerB：PCR扩增BabA2/UreI融合基因产物B：SmaI和SalI分步进行双酶切的结果2.3.1.2pCF-....

本文编号：3996483