PGC-1α/Nrf2参与曲格列酮诱导心肌细胞线粒体损伤及细胞自噬
发布时间：2024-01-26 22:13
目的本研究旨在应用体外培养的人源心肌细胞揭示曲格列酮诱导的心肌细胞毒性特征,并从线粒体氧化应激和自噬角度探讨其潜在的毒作用机制。方法应用人源心肌细胞AC16,给予不同浓度的曲格列酮处理24 h,通过显微镜观察细胞形态改变;CCK-8法检测细胞存活率;LDH检测膜完整性评价药物的细胞毒性。应用高内涵成像分析系统,利用荧光探针TMRM和CM-H2DCFDA检测线粒体膜电位和全细胞活性氧自由基的水平;利用荧光素酶化学发光法检测ATP含量变化;应用RT-qPCR检测mtDNA变化评价药物线粒体毒性。Western blotting检测调控线粒体新生的PGC-1α信号通路和调节细胞抗氧化的Nrf2信号通路;自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比值和p62蛋白的表达。结果与正常对照组相比,曲格列酮可剂量依赖性引起细胞质皱缩、细胞存活率显著下降(r=-0.928,P<0.05)和LDH漏出增加(r=0.746,P<0.05);给予10、20μM的曲格列酮可明显降低细胞线粒体膜电位、mtDNA拷贝数、ATP含量,增加活性氧自由基含量(P<0.05);曲格列酮可显著...
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
Abstract
前言
第一部分 曲格列酮对AC16细胞毒性作用的影响
1.1 前言
1.2 实验材料
1.2.1 实验细胞
1.2.2 细胞培养主要试剂
1.2.3 细胞培养主要耗材
1.2.4 细胞培养主要仪器
1.2.5 溶液配制
1.3 实验方法
1.3.1 AC16 细胞的培养
1.3.2 形态观察
1.3.3 CCK-8 法测细胞存活率
1.3.4 LDH法测细胞膜完整性
1.3.5 数据处理及统计学分析
1.4 实验结果
1.4.1 曲格列酮对AC16 细胞形态的影响
1.4.2 曲格列酮对AC16 细胞存活率的影响
1.4.3 曲格列酮对AC16 细胞LDH漏出的影响
1.5 讨论
1.6 小结
第二部分 曲格列酮对AC16 细胞线粒体功能的影响
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 实验细胞
2.2.2 主要试剂
2.2.3 主要耗材
2.2.4 主要仪器
2.2.5 溶液配制
2.3 实验方法
2.3.1 AC16 细胞的培养
2.3.2 Mito SOX Red测线粒体ROS
2.3.3 CM-H2DCFDA测全细胞ROS
2.3.4 Mito tracker Green测线粒体含量
2.3.5 TMRM测线粒体膜电位
2.3.6 RT-qPCR测 mtDNA
2.3.7 荧光素酶测ATP含量
2.3.8 数据处理及统计学分析
2.4 实验结果
2.4.1 曲格列酮对AC16 细胞ROS的影响
2.4.2 曲格列酮对AC16 细胞线粒体含量和膜电位的影响
2.4.3 曲格列酮对AC16 细胞mtDNA的影响
2.4.4 曲格列酮对AC16 细胞ATP含量的影响
2.5 讨论
2.6 小结
第三部分 曲格列酮对AC16 细胞PGC-1α和 Nrf2 通路的影响
3.1 前言
3.2 实验材料
3.2.1 实验细胞
3.2.2 主要试剂
3.2.3 主要耗材
3.2.4 主要仪器
3.2.5 Western blotting主要试剂配制
3.3 实验方法
3.3.1 AC16 细胞的培养
3.3.2 蛋白免疫印迹
3.3.3 数据处理与分析
3.4 实验结果
3.4.1 曲格列酮对AC16 细胞PGC-1α通路的影响
3.4.2 曲格列酮对AC16 细胞Nrf2 通路的影响
3.4.3 曲格列酮对AC16 细胞PGC-1α和 Nrf2 通路的时间效应
3.5 讨论
3.6 小结
第四部分 曲格列酮对AC16 细胞自噬的影响
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 实验细胞
4.2.2 主要试剂
4.2.3 主要耗材
4.2.4 主要仪器
4.2.5 溶液配制
4.3 实验方法
4.3.1 AC16 细胞的培养
4.3.2 蛋白免疫印迹
4.3.3 数据处理与分析
4.4 实验结果
4.4.1 曲格列酮对AC16 细胞自噬蛋白的影响
4.5 讨论
4.6 小结
讨论
致谢
参考文献
综述
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
导师评阅表
本文编号：3885786
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摘要
Abstract
前言
第一部分 曲格列酮对AC16细胞毒性作用的影响
1.1 前言
1.2 实验材料
1.2.1 实验细胞
1.2.2 细胞培养主要试剂
1.2.3 细胞培养主要耗材
1.2.4 细胞培养主要仪器
1.2.5 溶液配制
1.3 实验方法
1.3.1 AC16 细胞的培养
1.3.2 形态观察
1.3.3 CCK-8 法测细胞存活率
1.3.4 LDH法测细胞膜完整性
1.3.5 数据处理及统计学分析
1.4 实验结果
1.4.1 曲格列酮对AC16 细胞形态的影响
1.4.2 曲格列酮对AC16 细胞存活率的影响
1.4.3 曲格列酮对AC16 细胞LDH漏出的影响
1.5 讨论
1.6 小结
第二部分 曲格列酮对AC16 细胞线粒体功能的影响
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 实验细胞
2.2.2 主要试剂
2.2.3 主要耗材
2.2.4 主要仪器
2.2.5 溶液配制
2.3 实验方法
2.3.1 AC16 细胞的培养
2.3.2 Mito SOX Red测线粒体ROS
2.3.3 CM-H2DCFDA测全细胞ROS
2.3.4 Mito tracker Green测线粒体含量
2.3.5 TMRM测线粒体膜电位
2.3.6 RT-qPCR测 mtDNA
2.3.7 荧光素酶测ATP含量
2.3.8 数据处理及统计学分析
2.4 实验结果
2.4.1 曲格列酮对AC16 细胞ROS的影响
2.4.2 曲格列酮对AC16 细胞线粒体含量和膜电位的影响
2.4.3 曲格列酮对AC16 细胞mtDNA的影响
2.4.4 曲格列酮对AC16 细胞ATP含量的影响
2.5 讨论
2.6 小结
第三部分 曲格列酮对AC16 细胞PGC-1α和 Nrf2 通路的影响
3.1 前言
3.2 实验材料
3.2.1 实验细胞
3.2.2 主要试剂
3.2.3 主要耗材
3.2.4 主要仪器
3.2.5 Western blotting主要试剂配制
3.3 实验方法
3.3.1 AC16 细胞的培养
3.3.2 蛋白免疫印迹
3.3.3 数据处理与分析
3.4 实验结果
3.4.1 曲格列酮对AC16 细胞PGC-1α通路的影响
3.4.2 曲格列酮对AC16 细胞Nrf2 通路的影响
3.4.3 曲格列酮对AC16 细胞PGC-1α和 Nrf2 通路的时间效应
3.5 讨论
3.6 小结
第四部分 曲格列酮对AC16 细胞自噬的影响
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 实验细胞
4.2.2 主要试剂
4.2.3 主要耗材
4.2.4 主要仪器
4.2.5 溶液配制
4.3 实验方法
4.3.1 AC16 细胞的培养
4.3.2 蛋白免疫印迹
4.3.3 数据处理与分析
4.4 实验结果
4.4.1 曲格列酮对AC16 细胞自噬蛋白的影响
4.5 讨论
4.6 小结
讨论
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