基于Calpain-ERK信号通路研究Calpeptin对雌激素诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影

发布时间：2024-06-28 02:05

　　目的:研究钙激活中性蛋白酶(Calpain)抑制剂Calpeptin对雌二醇(E2)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响,并探讨其作用机制。方法:以人乳腺上皮细胞MCF-10A为研究对象,采用E2诱导制备转化细胞模型。将细胞分为对照组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]、E2转化组(50 nmol/L)、E2转化+Calpeptin组(50 nmol/L E2+1μmol/L Calpeptin),以相应含药培养基连续培养15代。然后采用MTT法检测细胞的增殖率(24、48 h),采用平板克隆试验检测细胞的克隆形成率,采用悬浮成球试验检测细胞的成球数;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测细胞中干性标志物(CD44、Nanog、OCT4)和细胞外信号调节激酶(ERK)m RNA表达水平,并采用Western blotting法检测细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平。另取E2转化细胞分为对照组(0.1%DMSO)和U0126(ERK抑制剂)组(10μmol/L),按上述方法测定细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中CD44...

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

图1各组细胞的形态学特征显微图（×200)

细胞形态学观察发现，与对照组比较，E2转化组细胞形态发生了明显变化，细胞呈长梭形贴壁生长，细胞体积变大，具有一定的间质细胞样特征；E2转化+Calpeptin组细胞形态与对照组接近。各组细胞形态学特征显微图见图1。3.2Calpeptin对E2转化细胞增殖能力的影响

图2各组细胞克隆形成情况平板图

与对照组比较，E2转化组细胞的克隆形成率显著升高（P<0.01）；与E2转化组比较，E2转化+Calpeptin组细胞的克隆形成率显著降低（P<0.01）。各组细胞克隆形成情况平板图见图2，克隆形成率测定结果见表3。3.4Calpeptin对E2转化细胞自我更新能力的影响

图3各组细胞成球情况显微图（×40)

与对照组比较，E2转化组细胞的成球数显著增加（P<0.01）；与E2转化组比较，E2转化+Calpeptin组细胞的成球数显著减少（P<0.05）。各组细胞成球情况显微图见图3，成球数测定结果表4。3.5Calpeptin对E2转化细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK....

图4各组细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK、p-ERK蛋白表达电泳图

与对照组比较，E2转化组细胞中CD44、Nanog、OCT4和p-ERK蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）；与E2转化组比较，E2转化+Calpeptin组细胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白的表达水平均显著降低（P<0.05或P<0.01);3组细胞中ER....

本文编号：3996276