低氧微环境对神经胶质瘤细胞线粒体功能的影响

发布时间：2017-07-14 07:02

  本文关键词：低氧微环境对神经胶质瘤细胞线粒体功能的影响

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【摘要】：第-部分：低氧微环境对神经胶质瘤细胞线粒体通透性转换孔功能的影响[目的]线粒体通透性转化孔作为线粒体内膜和外膜上多种蛋白组成的蛋白孔道,对线粒体内外物质的通透性起着重要作用,MPTP开放可以导致小分子物质大量进入线粒体内膜,引起线粒体肿胀、外膜破裂,使位于线粒体内外膜之间的细胞色素C、细胞凋亡因子等物质进入细胞质,引起凋亡。该部分研究通过测量不同氧浓度下MPTP的开放情况,了解不同氧浓度对线粒体功能的影响。[方法]神经胶质瘤T98g细胞在常氧下培养至细胞性状稳定表达,三气低氧培养箱分5%、0.1%两个不同的氧浓度,培养细胞,将同源同代细胞传代于6盘培养皿中,低氧组和常氧组各3盘细胞,对应24h、48h,72h。于相应时间将对应的细胞用线粒体通透性转换孔试剂盒处理后,在流式细胞仪下膜通透性转化孔的开放情况(激发波长488nm)。[结果]神经胶质瘤T98g细胞在5%的低氧条件下膜通透性转换孔开放程度与常氧组相似；0.1%低氧组较常氧组MPTP开放程度明显增加：同等低氧程度下,细胞所处低氧时间越长,其膜通透性转换孔开放程度越高：常氧组、5%低氧组、0.1%低氧组3组细胞,在相同培育时间下,氧浓度越低,其膜通透性转换孔开放程度越高。[结论]神经胶质瘤T98g细胞系在适度低氧微环境下,线粒体通透性转换孔开放程度轻度增加,低氧程度进一步增加至极度低氧后,线粒体通透性转换孔开放程度明显增加。第二部分：低氧微环境对神经胶质瘤细胞线粒体膜电位的影响[目的]线粒体膜电位是指线粒体内膜与外膜两侧的电位差,引起线粒体生物膜两侧产生不同的离子浓度,是反应线粒体功能完整性较为敏感的指标,该部分研究通过对不同氧浓度下线粒体膜电位的研究,了解不同氧浓度对线粒体功能的影响,从亚细胞层面探寻低氧微环境对神经胶质瘤T98g细胞凋亡的影响。[方法]将神经胶质瘤T98g细胞在常氧下培养至细胞性状稳定表达,低氧培养箱分5%、0.1%两个不同的氧浓度培养细胞,将同源同代细胞传代于不同的12孔板中,低氧组和常氧组各3盘细胞,对应48h,72h；使用6cm细胞培养皿培养细胞,48小时、72小时后进行线粒体提取,并于相应时间对相应的细胞加入稀释后的JC-1染色剂,孵育20分钟后,于激光共聚焦显微镜下观察(波长n=485nm以及n=570nm),并观察荧光强度。[结果]正常氧浓度下,神经胶质瘤T98g细胞线粒体膜电位正常,在JC-1的染色下呈红色；5%低氧组在激光显微镜下多呈红色,少量线粒体呈绿色,0.1%低氧组线粒体经JC-1染色后,线粒体多呈绿色,少量线粒体呈红色；神经胶质瘤细胞在同等低氧情况下培育时间越长,线粒体经JC-1染色后绿色荧光程度越强。[结论]神经胶质瘤T98g细胞系在常氧和5%的低氧微环境下,线粒体膜电位多呈红色荧光,线粒体功能正常,而0.1%低氧下线粒体膜电位多呈绿色,说明线粒体膜电位下降明显,线粒体功能明显下降。
【关键词】：神经胶质瘤细胞 低氧微环境 凋亡 线粒体 膜通透性转换孔 神经胶质瘤细胞 低氧微环境 凋亡 线粒体 膜电位
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-18
• 参考文献16-18
• 第一部分：低氧微环境对神经胶质瘤细胞线粒体通透性转换孔功能的影响18-31
• 材料和方法19-22
• 实验结果22-25
• 讨论25-28
• 参考文献28-31
• 第二部分：低氧微环境对神经胶质瘤细胞线粒体膜电位的影响31-49
• 材料和方法32-35
• 实验结果35-40
• 讨论40-46
• 参考文献46-49
• 全文总结49-50
• 综述50-59
• 参考文献55-59
• 研究生期间发表文章情况59-60
• 致谢60

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本文编号：540058