缺氧诱导胶质瘤细胞逆分化的在体研究

发布时间：2017-08-06 05:09

  本文关键词：缺氧诱导胶质瘤细胞逆分化的在体研究

  更多相关文章： 缺氧 胶质瘤细胞 胶质瘤干样细胞 逆分化

【摘要】：背景及目的在中枢神经系统,恶性程度与致死率最高的肿瘤为胶质瘤。虽然已有手术切除、放疗和化疗的规范治疗,但患者预后欠佳,肿瘤术后极易复发,且复发肿瘤恶性程度更高,放化疗更耐受。因此,亟需发展新的治疗手段来改善胶质瘤患者的预后。缺氧是实体瘤的一个重要特征,肿瘤干细胞的存在也已得到证实,且肿瘤干细胞处于缺氧微环境中。缺氧可以通过促进胶质瘤干细胞自我更新来加重胶质瘤恶性进展进而促进肿瘤的发生发展及放化疗耐受。然而,对于分化期胶质瘤细胞是否同样参与胶质瘤恶性进展并受缺氧微环境调控目前并未见明显报道。为此,我们拟通过在体研究,证明缺氧可以诱导分化期胶质瘤细胞逆分化形成胶质瘤干样细胞进而加重胶质瘤恶性进展。方法培养小鼠GL261胶质瘤细胞,免疫磁珠分选出CD133-GL261细胞,部分细胞缺氧培养21天,另一部分细胞常氧培养21天。luc慢病毒感染上述条件处理后的CD133-GL261细胞,获得稳定转染的GL261-Luc细胞。将C57小鼠随机分为4组,组1小鼠用缺氧培养21天后转染的细胞、组2小鼠用常氧培养21天后转染的细胞行颅内荷瘤(1×104/只),组1、组2小鼠均行常氧饲养(21%O2,5%CO2,74%N2)。于5d、10d、15d、20d、25d行活体成像,30天内观察生存率,行肿瘤标本大体观察及HE染色。组3、组4小鼠均用常氧培养21天后转染的细胞行颅内荷瘤(5×104/只),组3小鼠行低氧饲养(10%O2,5%CO2,85%N2),组4小鼠行常氧饲养(21%O2,5%CO2,74%N2)。于5d、10d、15d、20d、25d行活体成像,30天内观察生存率,行肿瘤标本大体观察、HE染色,并用免疫组化、WB、RT-PCR检测肿瘤干细胞标志物SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133表达情况。结果1、组1与组2活体成像比较:活体成像显示组1小鼠在第10天开始有明显肿瘤形成,25d后肿瘤体积进一步增大,而组2小鼠颅内无明显成瘤,配对样本T检验得P0.001,差异具有统计学意义。2、组3与组4活体成像比较:组3小鼠活体成像显示随着低氧饲养时间的延长,小鼠颅内肿瘤体积逐渐增大,而组4颅内成瘤不明显,使用配对样本T检验得P0.001。3、生存期分析:30天观察期内组1小鼠生存率低于组2小鼠,组3小鼠生存率低于组4小鼠,P0.0001,结果具有统计学意义。4、大体标本观察:组1、组3小鼠颅内有明显肿瘤形成,HE染色证实。而组2、组4颅内无明显成瘤。5、肿瘤干细胞标志物检测:(1)免疫组化显示组3肿瘤内SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133高表达;(2)RT-PCR检测得正常C57小鼠、组3小鼠、组4小鼠的SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133的RNA表达量,组3小鼠高于其余两组小鼠,单因素方差分析得P≤0.001,结果具有统计学意义,而正常C57小鼠、组4小鼠差异P0.05,结果无统计学意义;(3)WB检测显示与正常C57小鼠、组4小鼠相比,组3小鼠肿瘤标本SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133蛋白表达高,单因素方差分析得P0.05,而正常C57小鼠与组4小鼠相较无明显差异。结论1、体外缺氧培养细胞小鼠颅内荷瘤后有肿瘤形成且生存率较对照组明显降低,提示体外缺氧培养可以诱导胶质瘤干样细胞的形成。2、体外常氧培养细胞颅内荷瘤后小鼠行低氧饲养颅内可以成瘤,肿瘤干细胞标志物SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133表达阳性,与对照组相比低氧饲养组小鼠生存率明显降低,证明体内缺氧环境可以诱导胶质瘤干样细胞的形成。3、综上,胶质瘤缺氧微环境可以促使胶质瘤细胞逆分化形成胶质瘤干样细胞,进一步加重胶质瘤恶性进展。
【关键词】：缺氧 胶质瘤细胞 胶质瘤干样细胞 逆分化
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 英文缩略词表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 1. 前言11-13
• 2. 材料与方法13-26
• 3. 结果26-38
• 4. 讨论38-42
• 全文结论42-43
• 参考文献43-46
• 文献综述 胶质瘤治疗的未来展望46-52
• 参考文献50-52
• 攻读学位期间发表的文章52-53
• 致谢53

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本文编号：628463